艾德kras试剂盒说明书

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1、【产品名称】通用名称：人类KRAS基因7种突变检测试剂盒（荧光PCR法）英文名称：HumanKRASGene7MutationsFluorescencePolymeraseChainReaction(PCR)DiagnosticKit【包装规格】12测试/盒【预期用途】KRAS基因是人体肿瘤中常见的致癌基因。该基因的突变常见于多种恶性肿瘤，在肺癌患者中的突变率为15～30%，在结直肠癌患者中的突变率为20～50%。导致KRAS处于激活状态的突变主要位于第12和13密码子上。KRAS基因突变一般会使肺癌患者对EGFR酪氨酸激酶抑制剂产生耐药，使结

2、直肠癌患者对抗EGFR抗体类药物产生耐药。但是，2010年10月的最新研究发现第13密码子上的Gly13Asp（G13D）突变亦对抗EGFR抗体类药物有治疗反应性（参见：DeRoock.W.JAMA.2010;304(16):1812-1820）。因此，KRAS基因突变检测能提高肿瘤临床治疗的针对性，降低治疗费用，节省宝贵的治疗时间。大部分肿瘤的突变都是体细胞突变，突变细胞往往与野生型细胞混杂在一起，因此所提取的DNA常带有大量野生型DNA，所以对体细胞突变检测需要较高的特异性，而目前广泛使用的直接测序法检测能力有限，不能完全满足临床需要。本试

3、剂盒用于检测人类KRAS基因的12和13密码子上7种热点体细胞突变（见表1），试剂盒以DNA为检测样本，提供突变状态的定性评估。辅助临床医生筛选出可受益于肿瘤靶向药物的大肠癌等癌症患者。该产品用于组织中提取DNA的KRAS基因7种突变的检测，为临床医生对大肠癌或肺癌患者选择肿瘤靶向药物治疗提供参考。表1人类KRAS基因的12和13密码子上7种热点体细胞突变突变名称氨基酸变化碱基变化CosmicID公司命名Gly12Asp甘氨酸到天门冬氨酸GGT>GAT52112-2-AGly12Ala甘氨酸到丙氨酸GGT>GCT52212-2-CGly12Va

4、l甘氨酸到缬氨酸GGT>GTT52012-2-TGly12Ser甘氨酸到丝氨酸GGT>AGT51712-1-AGly12Arg甘氨酸到精氨酸GGT>CGT51812-1-CGly12Cys甘氨酸到胱氨酸GGT>TGT51612-1-TGly13Asp甘氨酸到天门冬氨酸GGC>GAC53213-2-A【检测原理】本试剂盒基于实时PCR平台结合了特异引物和双环探针两种技术，检测DNA样品中含有的突变基因。利用特异引物对突变靶序列进行高精准PCR扩增放大，与此同时，利用双环探针对扩增产物进行检测，结合特别的PCR反应程序和高特异Taq酶的使用，在实时

5、PCR平台上实现对样品DNA中突变的检测，以达到对稀有突变检测的高特异性和高灵敏度，即高的选择能力。【主要组成成份】试剂盒采用8联PCR管设计，每一个8联PCR管检测一个样品，8联管的1-7(或A-G，或8联PCR管两端各有一个小孔，小孔居侧端为1号管，小孔居中端为8号管)管内装有相应的KRAS基因7种突变检测和内控试剂，突变由FAM信号指示，内控由HEX（或VIC）信号指示；8（或H）号管作为DNA提取质量的外控检测管，亦由FAM信号指示，内控和外控作为对试剂、DNA质量以及操作本身的质控，选择的检测区域是人类KRAS基因相对保守的区段，约1

6、00bp，这样即便DNA有降解，外控和内控仍然能够最真实地反检测所用DNA的质量非常重要。由于肿瘤的复杂性，所采集的临床样品应KRAS基因有效的DNA量。每个PCR反应管内均含有5～10pM特异性引往往会混有正常组织细胞，不同类型样品正常细胞混杂程度不同，而且提取的物、20pM双环探针、12.5μMdNTPs、175μM氯化镁、1mM硫酸铵、2.5mMDNA纯度和质量也因样品类型而改变，尤其是用福尔马林固定的石蜡切片样氯化钾和纯化水等。（详见表2和表3）品，福尔马林会对DNA有交联和降解作用，因此请按下面推荐样品类型顺序表2试剂盒组成收集样品并

7、提取DNA用于检测，客户可根据临床实际样品的情况进行选择。试剂盒规格12测试1.推荐样品类型顺序：新鲜病变组织>冰冻病理切片>石蜡包埋病理组织或切8联PCR管反应条12条片。Taq酶（KRAS）35μL2.推荐使用商业化的试剂盒来提取人类基因组DNA。所提DNA需用紫外分光KRAS阳性质控品250μL光度计测定浓度，其DNA的OD260/OD280在1.8～2.0。提取完的DNA建议立表38联PCR管反应条的组成即进行检测，否则请于-20℃以下保存，保存时间不要超过6个月。管号检测试剂体积荧光信号3.从新鲜病变组织中取样应确定至少含有30%肿瘤

8、病变组织。1A12-2-A35μLFAM，HEX/VIC2B12-2-C35μLFAM，HEX/VIC4.石蜡包埋病理组织或切片样品应确定含有肿瘤病变