水培及生理指标的测定-

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1、水培前种子的处理把种子置于灭菌三角瓶中（第1天）↓（水洗1min）换成70%乙醇↓（摇晃5min，不能太激烈）水洗2次，每次1min↓换成15%次氯酸钠↓（5min）水洗3次，每次1min↓培养皿（双层滤纸）室温↓等种子基本露白，放4度冰箱↓点种子注意：PEG处理的要多点种子，因为处理后的叶子变蔫，质量变小。Hoagland培养液100×微量元素1L2LH3BO3309.2mg0.6184gMnCl.4H2O198mg0.396gZnSO4.7H2O23mg0.046gCuSO4.7H2O9.98mg0.01996g(NH4)6MoO24.4H2O2.48mg

2、0.00496g100×铁盐（Fe2+）（以下用一个就行）C10H12O8M2Na2Fe1.954g/LC10H12O8M2NaFe1.839g/L1×大量元素KH2PO4136.09mg/LKNO3505.5mg/LCa(NO3).4H2O1.18g/LMgSO4.7H2O492.94mg/L20×大量元素KH2PO42721.8mg/LKNO310110mg/LCa(NO3).4H2O23.6g/LMgSO4.7H2O9858.8mg/L8×大量元素PH5.8_6.0(KOH调)1L2.5L4LKH2PO41.0887g2.72175g4.3549gKNO

3、34.044g10.11g16.176gCa(NO3).4H2O9.44g23.6g37.76gMgSO4.7H2O3.9435g9.8587g15.774g注意：KH2PO4、KNO3、Ca(NO3).4H2O溶完后再加MgSO4.7H2O实验中常用酸碱的质量密度与浓度的关系名称分子式相对质量质量密度（Kg/L）百分浓度﹪（w/w）量浓度C（粗略）(mol·L－1)配1升1mol·L－1溶液所需数（ml）盐酸硫酸硝酸冰乙酸乙酸磷酸氨水氢氧化钠溶液HC1H2SO4HNO3CH3COOHCH3COOHH3PO4NH3·H2O36.4798.0963.0260.0

4、598.0635.0540.01.191.181.101.841.181.421.401.201.051.0751.710.900.9040.910.961.537.235.420.095.624.870.9065.332.3699.580.085.027.025.010.050.012.011.86.018.03.016.014.56.117.414.315.015.014.313.45.619.08456635969.9367677053Pro含量的测定在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。用磺基水杨

5、酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。试剂1.酸性茚三酮溶液：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml6mol/L磷酸（配20ml6mol/L磷酸时，加8mL的磷酸）中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中；2.3％磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml；3.冰醋酸；4.甲苯。实验步骤1.标准曲线的绘制（1）在分析天平上精确称取25mg脯氨

6、酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100μg。（2）系列脯氨酸浓度的配制取6个50ml容量瓶，分别盛入脯氨酸原液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5及3.0ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1，2，3，4，5及6μg/ml。（3）取6支试管，分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min。（4）冷却后各试管准确加入4ml甲苯，振荡30S，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。（甲苯有毒，最好带口罩）（5）用注射器

7、轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至石英比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm波长处进行比色。（换样品测量时，可用甲苯或乙醇润洗）（6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y）依脯氨酸浓度（X）而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2ml测定液中脯氨酸的含量（μg/2ml）。2.样品的测定（1）脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各0.5g，分别置大管中，然后向各管分别加入5ml3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min，（提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。（2）吸取2ml提取液于另一干净的带玻塞试

8、管中，加入2ml冰醋酸及2ml酸性茚三