杂交瘤技术和单克隆抗体技术ppt课件

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1、第四讲杂交瘤细胞和单克隆抗体技术第一节、免疫的基本知识一、免疫系统：分非适应性免疫和适应性免疫两类。1、非适应性免疫是由非特异性反应的细胞介导的。如：巨噬细胞的吞噬作用，泌细胞分泌的溶菌酶，以及中性细胞造成的细胞裂解机制。2、适应性免疫：是针对特定分子，而且可经反复暴露于外源分子使之加强淋巴细胞合成细胞表面受体或分泌特异性蛋白结合外源分子。这些分泌的蛋白称为抗体；可与抗体结合的分子被称为抗原。当一个分子被用于诱导适应性反应时，这个分子就被叫做免疫原。3、免疫系统含有109以上淋巴细胞遍布全身，保证

2、了它们在任何部位都能迅速反应。淋巴细胞由骨髓中的原始干细胞不断产生，经血液及淋巴系统循环，暂时停顿并积聚于称作淋巴器官的特异化的结构中，在哺乳动物中就是淋巴结和肝脏。在免疫反应过程中，免疫原积聚于一个淋巴器官中，这个淋巴器官就变成了免疫反应的焦点。B细胞：分泌抗体，并在细胞表面携带同一抗体的修饰型，功能相当于受体。毒性T细胞：携带结合抗原的细胞表面受体。辅助T细胞：在控制B细胞和细胞毒性T细胞反应方面起关键的调节作用。体液介导的适应性免疫反应：体液反应引发产生可结合外来抗原的循环抗体，由B淋巴细胞

3、产生，由辅助T淋巴细胞介导是抗体技术的基础。细胞介导的适应性免疫反应：毒性T淋巴细胞结合于外来或感染的细胞，随后将这些细胞裂解，辅助T细胞参与该反应。二、免疫系统能特异性地对无数种分子反应。免疫系统持续地受无数抗原刺激。免疫系统的一个主要形式是它能合成大量的抗体及细胞表面受体。各个带有不同抗原结合位点的抗体和T细胞受体与外来分子的结合提供了免疫反应特异性的基础。三、个别淋巴细胞识别个别抗原一个细胞识别一个抗原，因为单一淋巴细胞上的所有抗原受体是相同的。在成熟淋巴细胞表面的所有受体都是糖蛋白，体细胞

4、基因重组、突变及基因转录后加工等使受体产生107个以上的结合位点。抗原特异性通过确保只有一个类型的受体在一个细胞内被合成的过程来维持。虽然B细胞表面抗体和T细胞表面受体都具有类似的结构，但它们是由不同的基因家族编码的，其表达具有细胞型的特异性。B细胞上的表面抗体能结合可溶性抗原，而T细胞受体仅仅识别在其它细胞表面展示的抗原四、免疫系统能将外来微生物和分子与自身成分区别开来。五、系统记忆每一次与外来抗原的遭遇免疫反应遇到同一抗原时一次比一次强，具有特异性。免疫记忆可以延续动物终生。六、免疫反应的许多

5、性质是通过克隆选择确定的一种抗原活化一种淋巴细胞。当淋巴细胞表面受体结合抗原时，B淋巴细胞就被活化，分泌抗体被刺激而增殖（急剧分裂克隆）。七、一个有效免疫系统的成熟是由广泛的细胞间信息交换来调节的。第二节、抗体分子抗体是具有共同结构和功能形式的一大类糖蛋白。抗体分成五类：IgG、IgM、IgA、IgE和IgD（见表2-1）。一、IgG类抗体有两个相同的抗原结合位点含有抗原结合位点的两个区域被称作Fab片段，涉及到免疫调节的蛋白区称作Fc片段，在Fab和Fc片段之间的部分称作铰链区。重链分子量为5.

6、5kDlt；轻链分子量为2.5kDlt。二、不同类型抗体的区别IgG、IgM、IgA、IgE和IgD因重链形式不同而有所区别。它们的重链分别称作γ、μ、α、ε和δ。重链的不同使这些蛋白具有不同形式的免疫功能，并且在完成反应成熟的不同阶段发挥作用。这些差异主要是由于Fc片段上的蛋白序列不同所致。轻链只有两种：κ、λ。五、重链和轻链的可变区形成抗原结合位点一个重链的可变区和一个轻链的可变区结合形成一个抗原结合位点。可变区的异质性提供了动物有效进行免疫反应所需的无数结合位点的基础。序列异质性并不是由整个

7、可变区的每一部分决定的，而是集中在与抗原接触的位点上。多数可变性决定于每一个链的三个短区，它们形成轻链的三个超变区和重链的三个超变区。这些超变区形成抗原抗体结合的接触残基的主体，同时这些超变区位于扩展进入抗原反应区的短环上。由于它们是实际的抗原结合位点，故被认为是互补决定区。六、功能性κ、λ轻链和重链基因的一个明显特征是在所有细胞中这些基因转录后的选择性剪接是不同的（见图2）。200个V区，4个功能性J区。七、形成λ轻链pre-mRNA外显子也要重排（图3）。V-J-C-J-C。八、形成功能性重链

8、基因需要pre-mRNA外显子的重排（图4）。50—100种可变区，12个D区，4个J区。九、这些重组及其它机制产生了无数的抗原结合位点。十、等位基因排斥确保在任一B细胞中只有重新排列的一个轻链和一个重链被表达。产生不同重链和轻链的基因重组不总是产生一个功能基因，在B细胞分化过程中，轻链重排开始于κ区内。然后，若二倍体基因中的一个首先重排，产生一个功能性等位基因，另一个拷贝则进行重组。若二个重组都产生非功能性等位基因，那么重组就要λ位点开始，以同样的机制产生功能性重链。一旦重组产生