大豆磷脂对体外培养乳鼠神经细胞损伤保护作用的研究

《大豆磷脂对体外培养乳鼠神经细胞损伤保护作用的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、大豆磷脂对体外培养乳鼠神经细胞损伤保护作用的研究作者：王翠瑶张晓宏马洪林【摘要】目的：观察大豆磷脂脂质体对谷氨酸所致培养乳鼠神经细胞损伤的保护作用。方法：取新生大鼠大脑皮层神经细胞进行原代培养，8～10d后加入谷氨酸，造成神经细胞的损伤，SPL保护组在Glu损伤处理的同时加入不同浓度的大豆磷脂脂质体，测定乳酸脱氢酶、丙二醛及超氧化物歧化酶的含量，观察谷氨酸对神经细胞的兴奋毒性及大豆磷脂脂质体的保护作用。结果：加入谷氨酸后，神经细胞出现明显损伤性变化，培养上清液中LDH含量增加，细胞匀浆中MDA生成增加，SO

2、D含量明显减少。大豆磷脂脂质体在/ml～/ml浓度时能显著减轻上述损伤性变化。结论：大豆磷脂脂质体对谷氨酸所致培养乳鼠神经细胞兴奋毒性损伤具有显著的保护作用，其机制可能与大豆磷脂脂质体抗脂质过氧化作用有关。【关键词】大豆磷脂；脂质体；谷氨酸；神经细胞培养　　目前谷氨酸的兴奋毒性作用于缺血性脑损害的研究最多，脑缺血时突触前谷氨酸释放增加，再摄取减少，导致NMDA受体过度兴奋，Ca2+大量内流，产生离子依赖性兴奋毒性。大豆磷脂脂质体是一种人工制备的生物膜，它可嵌入细胞膜，利用膜的液化使膜的流动性增强，从而保护细

3、胞膜的完整性。国内有学者报道大豆磷脂能明显减轻脑缺血性损伤［1］，但大豆磷脂脂质体对谷氨酸造成体外培养的神经细胞兴奋毒损伤是否具有保护作用尚未见报道。我们利用谷氨酸产生兴奋毒性，对体外培养的神经细胞造成损伤，模拟体内脑缺血产生Glu对神经细胞造成的损伤，观察大豆磷脂脂质体浓度的累积对神经细胞损伤保护作用的关系，并探讨其可能的作用机制。1材料11动物0～1d的SD大鼠，由辽宁医学院实验动物中心提供。12药物与试剂L多聚赖氨酸和L谷氨酸购于美国Sigma公司；高糖DMEM培养基、F12培养基和胰蛋白酶购

4、于GIBCO公司；胎牛血清、马血清购于天津灏洋生物制品有限公司；盐酸阿糖胞苷(批号991201)购于上海华联制药有限公司；大豆磷脂购于北京清华紫光公司；乳酸脱氢酶测定试剂盒、丙二醛测定试剂盒、超氧化物歧化酶测试盒均购自南京建成生物工程研究所；其它所用试剂均为国产分析纯。13仪器HERAcell二氧化碳培养箱；OLYMPUS倒置显微镜；DZF6050真空干燥箱；751紫外分光光度计的大豆磷脂脂质体，其余处理同上。4LDH的测定各组细胞加处理因素后，收集培养上清液，参照试剂盒说明书测定培养液中LDH活性。

5、5神经细胞MDA、SOD的测定各组细胞加处理因素后，去除原培养液，用PBS洗2遍，每孔加入/LPBS，/LEDTA1mL，再加入1％TritonX1000μL，将24孔培养板置振荡器振荡1min使细胞溶解，加入25％H3PO4100μl以沉淀蛋白，于4℃离心1h，取上清液按试剂盒说明书测定MDA含量、SOD活性。蛋白质定量用考马斯亮兰试剂盒测定。6统计学处理多样本均数检验采用方差分析的方法，方差分析差异有显著性后再进行样本的两两比较。结果1培养神经细胞的形态学变化正常对照组新生乳鼠皮层神经细胞培养8

6、～10d后，镜下观察，神经细胞清晰可见，多数呈多极形或锥形，光晕明显，突起交织成网状，核不可见。损伤组加入谷氨酸后细胞胞体光晕消失，突起回缩，胞体折光性下降，核易见，部分胞体溶解。而SPL保护各组细胞更接近正常形态，说明SPL能明显改善神经细胞谷氨酸损伤的形态学变化。2培养上清液中LDH的变化与正常对照组相比，损伤组培养上清液中LDH漏出量明显增加(P＜)；而SPL保护各组与损伤组相比，LDH漏出量均明显下降，且呈剂量依赖性，但当剂量达到一定浓度时，SPL保护作用不再随着浓度的升高而增强，反而有所下降，见

7、表1。表1培养上清液中LDH的变化注：*与正常对照组比较，P＜；**与Glu损伤组比较，P＜；#与前一保护组比较，P＜。3培养神经细胞MDA含量及SOD活性的变化损伤组神经细胞匀浆中MDA含量显著增加，SOD活性显著降低。与损伤组相比，SPL保护各组随着剂量的增加，均可显著降低MDA的含量，同时升高SOD活性，并呈剂量依赖性；但当SPL达到一定浓度时，保护作用不再随着浓度的升高而增高，见表2。表2培养神经细胞MDA及SOD的变化注：同表1。讨论Glu是中枢神经系统内含量最高的兴奋性氨基酸，在维持神经细胞正

8、常信号传导中起着重要的作用。但Glu大量释放，激活Glu受体，就会引起一系列病理反应，导致神经细胞变性坏死。谷氨酸在细胞外液中的蓄积在缺血性脑损伤中发挥着重要作用。研究表明［4～6］，脑缺血后谷氨酸过度释放，激活了NMDA受体，引起Ca2+大量内流，细胞内过多的Ca2+激活磷脂酶A2触发花生四烯酸代谢瀑布，产生氧自由基，花生四烯酸和氧自由基又促使神经细胞释放谷氨酸，形成恶性循环。自由基及其引发的脂质过氧化对生物膜