肾病综合征患儿T细胞亚群与激素敏感关系的研究

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1、肾病综合征患儿T细胞亚群与激素敏感关系的研究作者：王惠萍，毛云英，辛芳琴，刘海燕【关键词】T细胞亚群;IL［摘　要］目的：探讨原发性肾病综合征(INS)患儿外周血T细胞亚群与激素(ＧＣ)治疗效应的关系。方法：按激素疗效的不同将31例INS患儿分为激素敏感组(17例)及激素耐药组(14例)，及20例对照组均于治疗前抽取静脉血分离单个核细胞，加入植物血凝素刺激其生长、传代。4h~7h时后取其上清液，用酶联免疫吸附双抗夹心法(ELISA)检测IL4、IFNr。结果：INS中激素敏感组体外PBMCs经PHA刺激产生的IL4水平(±)明显高于激素耐药组(±)及对照组(±

2、)(P。结论：ＮＳ患儿外周血Th2细胞亚群表达升高可能是ＧＣ治疗敏感的原因之一。［关键词］T细胞亚群;IL4、IFNr;肾病综合征原发性肾病综合征(idopathicnephroticsyndromEiNS)是以大量蛋白尿、低白蛋白血症、高脂血症和水肿为主要临床特点的常见肾小球疾病。CD4+T细胞依其分泌的细胞因子的类型分为两个亚群Th1和Th2。Th1以产生γ干扰素为特征，Th2以产生IL4为特征。以糖皮质激素治疗INS在国内外广为接受并采纳，但约1/4的INS患者出现激素耐药。Th1/Th2失衡与激素疗效的关系国内无人报道。本文将对INS激素疗效与T细胞亚

3、群之间的关系进行探讨。　　1　对象和方法　对象　　　　　　　　　　　　来自XX年2月至XX年2月间在我院，西安交通大学第一医院、儿童医院、西安市中心医院诊断为INS患儿31例，全部符合小儿XX年11月珠海会议中华儿科肾脏病学组制定的INS诊断标准。男20例，女11例，年龄2岁~15岁。临床表现为单纯性肾病18例，肾炎性肾病13例，分为激素敏感组(17例)及激素耐药组(14例)。激素敏感组：应用激素后，8周内尿蛋白转阴；激素耐药组：应用激素后，8周内尿蛋白未转阴。对照组：20例健康儿童，其中男9例，女11例，年龄2岁~14岁，平均7岁(采血前均未患感染性疾病，未

4、服用过GC和免疫抑制剂)。　方法　　　　　　　　　　　　INS患儿于明确诊断后激素治疗前清晨空腹静脉取血ml，快速注入盛有肝素的无菌小瓶中，吸取淋巴细胞分离液(每10ml稀释血加ml~ml分离液)或1∶1置于离心管倾斜45度角，将用PBS稀释的血液在距分离层液面上1cm处沿试管壁缓慢加至分离层上面，将离心管置于水平式离心机内，在1℃~20℃下，100转离心20min，结束后用直头吸管轻轻插入灰白色层，沿管壁轻轻吸出灰白色的单个核细胞，盛入另一只离心管中，将所得的PBMNC混液用5倍体积的RPMI1640洗涤2次，依次以000转/min,min，100转/min

5、在室温下(1℃~2℃)离心10min，可去掉大部分混杂的血小板。在沉淀的PBMNC中加入1ml%氯化氨溶液，轻轻震荡20min，即可裂解红细胞，经100转/min，10min离心洗涤，即可去除红细胞。RPMI1640或PBS洗涤离心3次后，加入10%小牛血清的RPMI1640培养基定容细胞，记数细胞后在调整至所需浓度，一般每毫升血中分离出1×106个单核细胞。用台盼蓝染液检查所分离的细胞活性，记数200个细胞，计算活细胞的百分率，一般活性应在95%以上。将细胞悬液接种于培养瓶中，加入2μgPHA/ml。将培养瓶放入3℃%~%CO2孵箱中培养4h~7h后收集上清

6、液，冻存于-20℃待测细胞因子。用酶联免疫吸附双抗夹心法(ELISA)检测PBMCs上清液IL4,IFNγ,的含量(进口试剂盒由深圳晶美公司提供)。2h尿蛋白含量测定采用磺基水杨酸比浊法。　统计学处理　　　　　　　　　　　结果用SPSS软件进行统计学处理，检验结果用±s表示。IFNγ方差不齐时用GamesHowell法。各组间采用方差分析及AVOVAq检验(NewmanKeuls检验及LSD双重检验)。　　2　结果INS中激素敏感组体外PBMCs经PHA刺激产生的IL4水平明显高于激素耐药组及对照组；INS患儿IFNγ水平明显高于对照组，激素敏感组及激素耐药组

7、之间差异无显著性。见表1，表2。表1　INS患儿与对照组PBMC上清液中2种细胞因子的检测结果(略)表2　不同组别P值比较INS患儿激素敏感组、激素耐药组及对照组PBMCs上清液中2种细胞因子检测结果(LeastSignificantDifference及SNK)。　　3　讨论INS是一种与免疫功能紊乱相关的疾病,自从1990年Fisher研究发现INS患儿存在T细胞功能紊乱以来，许多学者对INS的发病机制进行了广泛而深入的研究，研究发现活动期的INSCD4+下降及CD8+的升高；本文认为INS时Th1及Th2均被活化，Ｔｈ细胞亚群紊乱参与了INS的发病，而I

8、NS这种免疫介导的疾病不能用简单的某一