类风湿关节炎滑膜细胞凋亡及相关基因Fas表达的研究

《类风湿关节炎滑膜细胞凋亡及相关基因Fas表达的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、类风湿关节炎滑膜细胞凋亡及相关基因Fas表达的研究［摘要］目的：研究类风湿关节炎(RheumatoidArthritis,RA)患者滑膜组织中细胞凋亡及相关基因蛋白Fas的表达和意义。方法：采用免疫组织化学方法，对9例患者及8例正常对照滑膜组织中凋亡细胞及Fas的表达进行检测。结果：RA患者滑膜组织中细胞凋亡率明显低于对照组，而Fas阳性的细胞百分比却明显高于对照组。结论：RA患者滑膜组织中细胞凋亡的减少可能是导致滑膜过度增生进而关节功能丧失的原因之一，Fas表达虽增多但不能直接诱导细胞凋亡。［关键词］类风湿关节炎；细胞凋亡；免疫组织化学类风湿

2、关节炎(RA)是一常见的以关节组织慢性炎症性病变为主要表现的全身性疾病，我国成人中发病率约为%。RA的主要病理特征是关节滑膜的增生和软骨及骨组织的侵袭破坏，有很高的致残率，其发病机制目前尚不十分清楚。近年的研究表明，细胞凋亡是其发病中的一个重要机制［1～3］。我们采用TUNEL法和免疫组化法对甲醛固定及石蜡包埋的RA患者及对照的滑膜组织进行细胞凋亡及其相关基因Fas表达的研究，旨在探讨RA滑膜增生的机制及凋亡相关基因Fas介导的细胞凋亡在RA发病中的作用。1资料与方法临床资料在西安市第五医院住院手术治疗RA患者9例，均符合美国风湿病学会1987

3、年的RA诊断标准，其中男性2例，女性7例，年龄16岁~67岁，平均年龄(±)岁，病程1a~2a，平均病程(±)a。所有患者均有不同程度的关节活动性病变(有3个或3个以上关节持续性肿胀)，平均受累关节数为18个,6例类风湿因子(RF)阳性,3例阴性,血沉1mm/h~8mm/h，平均(±)mm/h，其中关节功能分级：Ⅰ级2例，Ⅱ级1例，Ⅲ级5例，Ⅳ级1例。关节X线表现分期：Ⅱ期2例，Ⅲ期1例，Ⅳ期6例。患者滑膜组织均取自滑膜切除术中的膝关节和/或腕关节，8例正常对照的滑膜组织取自骨折或外伤截肢者的膝关节。组织处理切取～1cm滑膜组织,4%多聚甲醛固

4、定,3%EDTA脱钙,石蜡包埋，用10%的多聚赖氨酸处理载玻片,滑膜组织切片为μm,室温贮藏备用。实验方法脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记法(TUNEL)检测细胞凋亡，3%H2O2处理样品切片10min后,用蛋白酶K(ProtEinaseK)于3℃消化min;取TdT和DIGdUTP各1μl,加入1μl标记缓冲液于滑膜组织片3℃杂交h;封闭液孵育30min,生物素化抗地高辛抗体反应30min;SABC稀释液反应30min,DAB显色,苏木素轻度复染。阳性对照采用乳腺癌石腊切片,阴性对照采用PBS替代第一抗体。Fas单克隆抗

5、体免疫组化滑膜切片二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水,%H2O2的甲醇液冲洗,磷酸盐缓冲液冲洗,加入1%牛血清白蛋白,20℃孵育1min。第一抗体用鼠抗人Fas多克隆抗体在℃下孵育1h，第二抗体(碱性磷酸酶生物素标记的抗鼠IgG)孵育20min，用3hydroxy2naphthylocid2,4dimethylaniline进行呈色反应。细胞核用苏木素染色。结果判定TUNEL法染色胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡细胞。Fas标记阳性物质主要定位于细胞的胞质，阳性结果为红色颗粒，并在光学显微镜10×10倍视野下,在每个样本关节滑膜组织中随

6、机选取2个～4个视野,分别计100个细胞内平均凋亡阳性细胞数和Fas阳性细胞数,统计学分析应用SPSS统计学软件做统计学分析，实验数据用±s进行RA组与对照组间t检验，检测标准取双侧α=。2结果.1TUNEL法细胞凋亡在滑膜组织中的表达RA组与对照组均可见细胞凋亡,但RA患者滑膜衬里层中细胞凋亡率明显低于对照组，两组相比差异具有显著性(P.2Fas蛋白在RA患者滑膜组织中的表达RA组与正常对照组均可见Fas的阳性表达,但RA患者滑膜衬里层中Fas阳性的细胞百分比明显高于对照组，两组相比差异具有显著性(P表1凋亡细胞及Fas在滑膜衬里层细胞中的阳

7、性表达计数结果注:与对照组比较*P　　3讨论RA的病理特征主要表现为滑膜细胞(主要是成纤维细胞)的增殖与炎性细胞的浸润，导致滑膜增厚、骨与软骨组织的受损，最后导致关节的破坏。目前对滑膜增生的确切原因还不清楚，但这些细胞的积累肯定部分与细胞凋亡抵抗或缺陷有关［1］。本研究发现，RA患者滑膜细胞明显增生，而细胞凋亡率却明显减少，说明RA患者滑膜细胞不因过度增生而出现过多的细胞凋亡，符合其病理特点，提示滑膜细胞的凋亡障碍可能是导致滑膜增厚的原因之一。细胞凋亡受多种基因调控,有些基因如Fas、Bax、肿瘤坏死因子等诱导凋亡，而Bcl2、P53等抑制凋

8、亡的发生［4］。Fas蛋白是一种细胞膜表面受体，是Ⅰ型膜蛋白，属于TNF家族，FasL是TNF家族的细胞表面分子，属于Ⅱ型膜蛋白，Fas与FasL的结