编制说明-粮油检验 粮食中黄曲霉毒素的测定 免疫磁珠净化超高效液相色谱法-征求意见稿

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1、《粮油检验粮食中黄曲霉毒素的测定免疫磁珠净化超高效液相色谱法》标准编制说明黄曲霉毒素(Aflatoxins,AF)是一类化学结构类似的二氢呋喃香豆素的衍生化合物，主要由黄曲霉（Aspergillusflavus）、寄生曲霉（A.parasiticus）和模式曲霉（A.nomius）等在合适的温度、湿度条件下产生的有毒次级代谢产物。黄曲霉毒素在自然界中广泛存在，种类较多，主要常见的包括黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2。黄曲霉毒素对人畜有强烈的致病性、致癌性，严重危害人体健康，其中黄曲霉毒素B1被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构(IARC)划定为I类致癌

2、物，其毒性是氰化钾的10倍。国内外非常重视黄曲霉毒素的防控，为控制黄曲霉毒素的污染的危害，国际法典委员会（CAC）和美国食品与药品监督管理局（FDA）规定食品中黄曲霉毒素总量不能超过15μg/kg。我国早在2005年就颁布了粮食和食品中黄曲霉毒素B1（AFB1）的限量标准，在2017年最新颁布的国家食品安全标准《食品中真菌毒素限量》(GB2761-2017)规定了玉米、玉米面（渣、片）及玉米制品中AFB1的限量为20μg/kg，稻谷、糙米、大米中AFB1的限量为10µg/kg，小麦、大麦、麦片、小麦粉、其它谷物及去壳谷物AFB1的限量为5μg/kg。植物油脂(花生油、玉米油除外)中A

3、FB1的限量为10µg/kg，花生油、玉米油中AFB1的限量为20µg/kg。目前黄曲霉毒素的主要检测方法有薄层色谱法、酶联免疫吸附法、胶体金试纸条法、液相色谱法或液质联用法等方法。薄层色谱法成本低，但操作复杂，有机试剂污染大，目前应用较少；酶联免疫吸附法和胶体金试纸条法主要用于快速筛查，其成本低廉，操作方面，适用于基层和现场快速筛查使用，但由于其易受基质干扰，结果容易假阳性；液相色谱具有灵敏度高，准确性好，重现性好等优点，是目前使用最多的定量检测方法。但是由于目前样品处理以免疫亲和柱净化为主，其步骤烦琐，时间长，劳动强度大，成本高，因此亟需建立新的检测方法，既能保留免疫亲和柱良好的

4、净化效果和稳定性，又能够减低操作难度，减少操作时间和劳动强度，易于自动化处理的高精准低成本检测方法标准。为了满足当前我国粮食检测、监测定量分析的需要，本标准拟利用免疫磁珠的净化，基于液相色谱检测，建立一种高通量、快速、重复性好、易于自动化的黄曲霉毒素精准定量分析方法。本标准项目的研究有助于提高粮食样品检测、监测效率，降低成本。本标准对后续标准制定，以及粮食污染黄曲霉毒素的相关科研、标准制定起到较好的指导、参考、促进作用。1工作简况1.1任务来源及起草单位-7-根据2015年粮油行业标准制定计划的要求，由国家粮食局科学研究院负责《粮油检验粮食中黄曲霉毒素的测定免疫磁珠净化超高效液相色谱

5、法》起草工作。起草单位成立标准起草组进行本标准制定的各项工作。1.2标准研制主要工作过程（1）根据该标准的特点，2015年11月-2017年12月，查询了国内外资料，对相关检测机构、粮库、粮食加工企业进行了调研，并召开了第一次标准起草讨论会，确定了标准制订方案和工作计划。（2）2018年1月-2018年3月，在国家粮食局科学研究院实验室进行标准的研制工作，主要包括方法的优化，方法灵敏度测试，方法的线性范围确定，方法的回收率研究等。（3）2018年3月，编写了《粮油检验粮食中黄曲霉毒素的测定免疫磁珠净化超高效液相色谱法》标准草案及编制说明。（4）2018年3月-2018年7月，组织实验

6、室间方法验证。验证结果处理统计，并形成标准编制说明草案。（5）2018年7月，召开了第二次讨论会，形成标准和编制说明的征求意见稿，进行意见征询。2标准的编制原则和标准的主要内容2.1标准编制原则本标准是根据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构与编写规则》、GB/T20001.4-2015《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的规定进行编制的。2.2确定标准主要内容2.2.1标准的适用范围本标准规定了采用免疫磁珠净化超高效液相色谱测定粮食中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）的原理、详细操作步骤及结果计算。本标准适用于小麦、

7、玉米、稻谷和植物油等粮油样品中AFB1、AFB2、AFG1或AFG2的测定。2.2.2标准研制的总体思路2.2.2.1反应时间的优化免疫磁珠与样品稀释液的反应时间是磁珠净化的关键，将免疫磁珠与浓度为5μg/kg黄曲霉毒素B1标准溶液反应，分别考察不同反应时间（1、3、5、10、15分钟）结合效率，可以看出，反应5分钟后磁珠吸附毒素信号基本不变，说明5分钟的反应时间可以满足免疫磁珠反应的要求。-7-图1不同反应时间下免疫磁珠富集的AFB1含量2.2.2.2磁