第4章 细菌药敏试验及其耐药表型检测 ppt课件

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1、第4章细菌药物敏感试验及其耐药表型检测王辉北京大学医学部抗菌药物敏感试验测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏感性试验（AntimicrobialSusceptibilityTest），简称药敏试验（AST）。药敏试验的意义预测抗菌治疗的效果；指导抗菌药物的临床应用；发现或提示细菌耐药机制的存在，能帮助临床医生选择合适的药物，避免产生或加重细菌的耐药；监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染的流行病学，以控制和预防耐药菌感染的发生和流行。药敏试验MIC：在与微生物

2、生长速率有关的特定时间间隔内，通常是18～24小时，能够抑制被测菌生长的最低药物浓度。对倍稀释的优点：操作容易敏感株的MIC呈正态分布区分异常(R)与敏感(S)的菌群药敏试验折点的建立1.MIC的分布2.药代动力学和药效学定MIC的折点3.临床疗效和细菌清除率4.抑菌圈直径的分布………定抑菌圈折点统计学的线性回归计算错误率：尽可能减少极重要误差(假敏感率)MIC的分布药代动力学和药效学药代动力学：药物吸收，分布，代谢，排泄药效学：药物对机体的作用时间依赖型（％T>MIC〕：β-内酰胺类，大环内酯类浓度

3、依赖型（AUC/MIC比率〕：AGS,FQ这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案MIC与抑菌圈直径的线性关系耐药中介敏感RISLog2.MICD1d2抑菌圈直径（mm)v抑菌圈直径与MIC的关系不同国家的判定折点－可能不同原因：用药剂量不同，服药的间隔不同评价敏感时较保守更强调检测出耐药株（即特定的耐药群）技术因素：接种、培养基在我国主要遵循临床实验室标准化委员会（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI）制定的抗菌药物选择原则。敏感性分类(CLSI

4、的定义)敏感（Susceptible）用常规用量治疗有效常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的MIC5倍以上。耐药（Resistance）用常规用量治疗不能抑制细菌的生长MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度敏感性分类（2）中介(Intermediate)MIC接近血、体液中药物的浓度，治疗反应率低于敏感株药物生理浓集部位有效(尿-FQ)加大用药剂量可能有效缓冲区：防止操作的系统误差造成重大结果的判定错误药敏试验的方法学半定量…纸片扩散法(抑菌圈直径)MIC法：稀释法(肉汤、琼脂)自动化仪法抗生素连

5、续梯度法(Etest)流式细胞仪将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。纸片扩散法（Kirby-Bauer法）纸片扩散法水解酪蛋白（MH）培养基，pH7.2～7.4，做成琼脂厚度4mm，直径90mm的平板；挑取孵育16～24小时已分纯菌落，置于生理盐水管中

6、，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准。纸片扩散法用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液；然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度；最后沿平板内缘涂抹1周；平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或商品化的纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘大于15mm。纸片扩散法35℃孵育16～24小时量取抑菌圈直径；根据抑菌环的直径，按照CLSI标准判读，报告敏感、中介、耐药。2021/7/1018纸片扩散法－影响因素MIC接种菌量细菌生长率抗生素

7、含量、扩散性平皿厚度温度，预孵育时间2021/7/1019纸片扩散法－标准化CLSI：美国实验室标准化委员会(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute)每年修订更改包括质控新药的判定标准特殊耐药性的检测2021/7/1020CLSI的法规规定纸片含量、接种浓度、培养基、平皿厚度、判定标准、质控；规定常规测试报告的抗生素；不同的药判定标准不同；不同的菌判定标准也不同。2021/7/1021常规测试并报告的药物分组(1)肠杆菌科绿脓和非肠杆菌科一级氨苄西林头孢他啶，庆

8、大霉素头孢唑林，庆大霉素替卡西林，哌拉西林二级阿米卡星阿米卡星氨苄西林/舒巴坦头孢吡肟，头孢哌酮阿莫西林/克拉维酸氨曲南头孢呋肟，头霉素环丙沙星，亚胺培南头孢噻肟，头孢曲松替卡西林/克拉维酸环丙沙星，亚胺培南妥布霉素，复方磺胺替卡西林，哌拉西林三级氨曲南，头孢他啶头孢曲松卡那霉素，奈替米星氯霉素，奈替米星妥布霉素四环素，氯霉素2021/7/1022常规测试并报告的药物分组(2)葡萄球菌肠球菌一级苯唑西林，青霉素青霉素，氨苄西林二级红霉素类万古霉素克林霉素