紫外可见分光光度计课件

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1、第四节紫外可见分光光度计12一、紫外可见分光光度计基本组成光源单色器样品室检测器显示31.光源在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500nm。紫外区：氢、氘灯。发射150～400nm的连续光谱。45紫外可见分光光度计—基本组成2．单色器将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。包括狭缝、准直镜、色散元件67紫外可见分光光度计—基本组成光栅——衍射和干涉分出光波长等距棱镜——对不同波长的光折射率不同分

2、出光波长不等距色散元件8紫外可见分光光度计—基本组成3．样品室样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池：玻璃——能吸收UV光，仅适用于可见光区石英——不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）使用时注意保护透光面9紫外可见分光光度计—基本组成4．检测器：利用光电效应，将光信号转变为电信号的装置光电池光电管：紫敏:200～625nm；红敏：625～1000nm光电倍增管二极管阵列检测器：全波长光谱测量（非光学扫描）10紫外可见分光光度计—基本组成5．记录装置：讯号处理和显示系统11

3、二、紫外可见分光光度计—常见类型1．单光束分光光度计：特点：从光源到检测器只有一个光束，一束单色光，结构简单须将空白、样品池一次推入光路→移动误差一般不宜进行扫描测定光谱12续前2．双光束分光光度计：13特点：产生两束光，交替通过空白与样品池不用拉动吸收池，可以减小移动误差可以自动扫描吸收光谱14双光束图153．双波长分光光度计特点：有两个单色器，产生两束不同波长的光，测出两波长的吸收度利用吸光度差值定量消除干扰和吸收池不匹配引起的误差可固定一波长，扫描一波长，测绘A差值光谱可固定两束单色光的波长差扫描，测得一阶导数光谱16171

4、8一、定性分析二．结构分析三、定量分析定性鉴别纯度检查和杂质限量测定单组分的定量方法多组分的定量方法第五节分析方法19一、定性分析（一）定性鉴别定性鉴别的依据→吸收光谱的特征吸收光谱的形状吸收峰的数目吸收峰的位置（波长）吸收峰的强度(ε、)相应的吸光系数(ε、)20续前1．比较吸收光谱的一致性同一测定条件下，与标准对照物谱图或标准谱图进行对照比较例1p33212．比较吸收光谱的特征数值例2p34223．比较吸光度或吸光系数的比值：例3p3423二．结构分析（一）分析紫外吸收光谱的的几个经验规则从吸收光谱中初步推断官能团如果在200

5、-700nm区间无吸收峰，该化合物无共轭双键系统，该化合物为脂肪烃、脂环烃或他们的简单衍生物（氯化物，醇，醚，羧酸类等），也可能是非共轭烯烃。在220-250nm范围有强吸收带（K带），表示有α，β不饱和醛酮或共轭烯烃结构存在。在200-250nm范围有强吸收带（E带），结合250～290nm的中强吸收带（B带），说明该化合物具有芳香结构苯基。244.如果在250-350nm弱的吸收带（ε=10-100，R带），说明分子结构中含有醛、酮羰基或共轭羰基。5.300nm以上的强吸收带，则该化合物结构中可能具有两个以上的较大共轭体系。若

6、吸收强且具有明显的精细结构，说明为稠环芳烃，稠环杂芳烃或其衍生物。25光谱解析注意事项(1)确认max，并算出㏒ε，初步估计属于何种吸收带；(2)观察主要吸收带的范围，判断属于何种共轭体系；(3)乙酰化位移B带：262nm(ε302)274nm(ε2040)261nm(ε300)(4)pH值的影响加NaOH红移→酚类化合物，烯醇。加HCl兰移→苯胺类化合物。26（二)判断顺反异构通常反式异构电子非定域性较大，电子受到的束缚力较小，比顺式异构能更有效地共轭，形成大共轭体系，因而吸收波较长，吸收系数较大。顺式：λmax=280nmε

7、max=10500反式：λmax=295.5nmεmax=29000表3-527（三）判断互变异构体极性溶剂中非极性溶剂中：λmax=204，272nm（ε=16）；243nm（强峰）说明是酮式结构；烯醇式结构；原因分子间氢键溶质之间形成分子内氢键(酮式)（烯醇式）28（四）判断同分异构体λmax(nm)40027029三、纯度检查利用待测物与杂质在紫外可见光区吸光度的差异，选用适当的波长可以对待测物的纯度进行检查。检查肾上腺素中肾上腺酮时。30四、定量分析（一）单组分分析1．标准曲线法2．标准对照法3．吸光系数法31续前1．标准

8、曲线法32芦丁含量测定0.710mg/25mL33342．对照法：外标一点法注：当样品溶液与标准品溶液的稀释倍数相同时353.吸收系数法例4：维生素B12的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207，用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0