检验核医学放射免疫分析和免疫放射分析

《检验核医学放射免疫分析和免疫放射分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、检验核医学第五章体外放射分析概述体外放射分析体外放射分析是在体外条件下，以放射性标记物为示踪剂，以结合反应为基础，以放射性测量为定量手段，在试管中进行的对体内微量活性物质进行定量分析的核技术的总称。放射性标记物：*Ag、*Ab、*L、*S特异性结合剂：Ab、R、E分析对象：血液(血清、血浆)、尿液、唾液、组织匀浆液、分离的组分特点1.灵敏度高最小可测量为10-9-10-15g2.特异性强利用专一性强的结合反应3.精确度好有效的质量控制方法4.放射性不引入体内5.所需待测样品少50-200l6.试剂药盒化，操作简便、快速7.测量微机化，方

2、便、快捷，客观、准确类型竞争性体外放射分析标记物结合剂放射免疫分析*AgAb(RIA)竞争蛋白结合分析*Ag血浆中固有的(CPBA)激素载体蛋白(TBG)放射受体分析*LR(RRA)放射酶分析*SE(REA)非竞争性体外放射分析免疫放射分析*Ab*Ab(IRMA)受体的放射分析*LR(RBA)酶的放射分析*SE(ERA)放射免疫分析(RIA)基本原理1RIA反应式分离剂*Ag+Ab*Ag-Ab*Ag-Ab+分离剂AgAg-AbAg-Ab1)一定量*Ag、不定量Ag与限量Ab进行竞争抑制结合反应2)*Ag-Ab与Ag成负相关关系

3、(反比)3)在实际工作中，用一系列已知浓度的Ag(标准品)进行实验制备剂量反应曲线(标准曲线，[*Ag-Ab]－[Ag]曲线)，未知样品在相同条件下实验，其浓度通过标准曲线查出2RIA数学函数式k1Ag+AbAg-Abk2P+QPQP=[Ag]+[*Ag]P0=[Ag0]+[*Ag0]Q=[Ab]Q0=[Ab0]PQ=[Ag-Ab]+[*Ag-Ab]k1[PQ][PQ]K=——=————=———————(1)k2[P][Q][P]([Q0]-[PQ])[PQ]=———————(2)([P0]-[PQ])[Q]将B=[PQ]/[P0]、

4、B/F=B/(1-B)=[PQ]/[P]代入(1)B1K=———×———————(3)展开重排1–B[Q0]-B[P0][Q0]1[Q0]B2–B(1+———+———)+———=0(4)[P0]K[P0][P0]将B=1-F代入(3)[Q0]11F2–F(1-———-———)+———=0(5)[P0]K[P0]K[P0]定义R=B/F，由B+F=1得B=R/(1+R)代入(3)R2+R(1+K[P0]–K[Q0])–K[Q0]=0(6)3RIA剂量反应曲线4方法流程加样→温育→分离→测定→数据处理→签发检测报告基本试剂1标准抗原(Ag)2

5、标记抗原(*Ag)3抗血清(抗体，Ab)1标准抗原(Ag)已知含量的非标记抗原用途(1)免疫动物，制备抗体(2)制备标记抗原(3)作为标准品参与RIA反应，绘制剂量反应曲线要求(1)质量上高纯度与被测抗原属同一物质，具有相同的免疫(生物)活性，高度纯化(2)数量上高准确度分一级标准(国家或国际标准)二级标准(厂家或实验室标准)(3)稳定性好，便于贮存、运输和使用2抗血清(抗体，Ab)含有抗体的血清质量指标(1)亲和力(2)交叉反应率(3)滴度(1)亲和力Ab与Ag的结合能力，用亲和常数K表示Scatchard作图法得：B/F=K[Q0]–

6、K[PQ]为一直线K=直线斜率K>109L/mol(2)交叉反应率Ab与Ag类似物的结合程度，表示Ab的特异性。分别用Ag和Ag类似物（Ag#）作剂量反应曲线Ab与*Ag结合被抑制50%时[Ag]量交叉反应率=Ab与*Ag结合被抑制50%时[Ag#]量(3)滴度又称效价，反映与一定量Ag特异结合的Ab的浓度,用稀释度表示用一定量标记Ag与不同稀释度的Ab反应，作B%-Ab稀释度曲线，B%=50%时对应的Ab稀释度即为Ab滴度,合适的滴度为1:104-1063标记Ag常用125I和3H标记化合物要求：(1)适当高的放射性比活度影响方法的灵敏

7、度和精密度，标记Ag化学量≤被测Ag的最小量(2)放射化学纯度>95%影响方法的灵敏度(3)免疫活性与未标记Ag基本保持一致(4)稳定性好，在一定条件下，稳定期1-3月标记Ag与Ab的用量对测定的影响(1)待测Ag含量较高*Ag的比活度↓Ab的滴度↓灵敏度↓曲线范围↑(2)待测Ag含量较低*Ag的比活度↑Ab的滴度↑灵敏度↑曲线范围↓分离技术1非特异性(1)吸附法分离剂：葡聚糖凝胶包被活性炭(DCC)F被吸附沉淀，重复性差(2)沉淀法分离剂：聚乙二醇(PEG)B被沉淀，分离迅速，非特异结合率高(3)抽滤法常用滤膜：玻璃纤维滤膜、微孔滤膜B

8、与F的分子量差别明显时分离效果好2特异性分离方法(1)双抗体法分离剂：第二抗体(抗抗体，Ab2)分离时间长，非特异结合率低(2)双抗体+PEG法分离迅速，非特异结合率低(3)固相分离法固相材料