银耳多糖对红细胞膜保护作用初探

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1、维普资讯http://www.cqvip.com1992正首都医学院学报Vo1．13No．2第13卷第2期JournalofCapitalInstitute0fMedicine1992一、D银耳多糖对红细胞膜保护作用初探0l’．／⋯首都医学院实验中心曾稻晖宋晓缸黄沛力『?5．j提要．用部苯三酚在碱性条件下自氧化产生的超氧阴离子自由基(01)对红细胞膜的过氧化损伤作用为研究模型．探讨银耳多糖对红细胞膜的保护作用。结果表明，银耳多糖对红细胞膜有抗氧化作用，表现为膜蛋白交联作用减少膜流动性趋于正常红细胞溶血率降低。通过部苯

2、三酚在碱性条件下自氧化的试验，提示银耳多糖对邻苯三酚自氧化反应投有抑制作用。关键调：堡三查擅!錾玺腿膜L超氧阴离子皂量量分粪号：Q592．1生物体内源性自由基或外源性自由基耳中提取并纯化；邻苯三酚(A．R)；l，6二均会导致细胞膜明显损伤，也是导致炎症、苯基一1，3，5一乙三烯(DPH)：Fluka产品。衰老和癌变等的原因之一。而超氧阴离子1．2红细胞膜的制备自由基(Oi)是生物体内主要的自由基，可按照Dodge“。低渗(pH8．4)溶液方法通过自由基链锁反应引起细胞膜过氧化并制备．用Lowry法测定膜蛋白含量。导致

3、膜结构和功能的损伤。大量试验证1_3氧化和抗氧化红细胞膜的制备明银耳多糖具有多方面的生物活性和功取红细胞膜悬浮液(浓度2～3rag／能，它能控制细胞分裂和分化，调节细胞的ml，pH8．4)1．0ml，加入一定量的银耳多生长，并具有增强免疫的功能和抗衰老等糖溶液，37℃温育10rain，然后加八i00l作用]。本文用邻苯三酚在碱性条件下自新鲜制备的浓度为0．1mol／L的邻苯三酚氧化产生的超氧阴离子自由基Oi，与红溶液，在37℃温育10min．立即用6倍pH细胞膜过氧化作用为研究模型，通过膜蛋7．410mmol／L磷酸

4、缓j巾液稀释并在4℃白电泳实验，膜荧光偏振实验，红细胞溶血15000r／min下离心4Omin，弃去上清液．率和自旋标记细胞膜的电子自旋共振波谱膜备用(称抗氧化膜)。用同法制备不加银测定等方法来探讨银耳多糖对红细胞膜的耳多糖(称氧化膜)或先加邻苯三酚后再加保护作用。结果表明银耳多糖对红细胞膜银耳多糖的膜溶液。有抗氧化作用。为进一步研究其作用机理1．4膜蛋白的分析——SDS一聚丙烯酰胺提供有价值的依据。凝胶电泳法(SDS—PAGE)取上述各种红细胞膜溶液进行SDS—1材料与方法PAGE垂直电泳分离红细胞膜蛋白，经考马斯

5、亮蓝(CoomassiebrillantblueR25O)染1．1试剂色和醋酸脱色后，用CS一930型薄层扫描人血红细胞：来自北京市红十字血液仪(日本岛津)对凝胶板进行扫描。中心；银耳多糖(tremellafuciformis1．5膜荧光偏振试验polysaccharideTFS)：系本室从福建省产银分别取氧化或抗氧化膜悬浮液20收靖日期．1992年2月26日ml用等量的2．0X10mol／kDPH标·1O0·维普资讯http://www.cqvip.com记，按文献5的方法用Hitachi65010荧取红细胞膜溶液

6、lml，加入(或不加)光分光光度计和荧光偏振片在室温下分别一定量的银耳多糖，温育10min，然后加测定各膜溶液的偏振度P，激发波长为入lOl新配制的邻苯三酚溶液(0．1mot／360nm，发射波长k为4．30nm按下列分L)，迅速摇匀，用分光光度计在420nm下式计算偏振度P和微粘度。每隔30s测一次A值，A值～时间￡作P—l_-(Jl,nG图(图1)一-JGLHJⅫ2P”一—0．4—6-P、J一、h、1w1分别表示起偏器和检偏器光轴垂直或平行时的荧光强度，G为校正因子。l6自旋标记细胞膜的电子自旋共振(electr

7、onspinresonanceESR)波谱测定取一定量的压积红细胞膜，加入一定z／m；n量5NS自旋标记物，在37℃温育过夜，用围1邻苯三酚自氧化速率pH7．4缓冲溶液洗涤至上清液检测不出曲芋离的自旋标记物信号。2结果取标记好的红细胞膜，加入(或不加)一定量的银耳多糖，在37℃温育10m[n，2．1人血红细胞膜经邻苯三酚作用后．在再加入一定量新配制的邻苯三酚溶液(O．1SDSPAGE图谱和扫描图上均显示出一mo

8、／L)，混匀后吸入石英管在室温下用条明显的高分子聚合物(HMP)区带．而加BRUKERESP300型电子自

9、旋共振仪(西银耳多糖抗氧化的膜溶液几乎不显示德)测定波谱。测定条件：x波段；微波功率HMP区带，但带l、2及其他膜蛋白量均减10raW；调剂频率100kHz；调剂幅度2．5少。见图2G2．2荧光偏振度尸与微粘度之坷有一1．7红细胞溶血率测定定关系，P值越大，也越大，表示膜流动取压积红细胞0．25ml，加入(或不性降低经邻苯三酚过氧化作用的人血红