黑曲霉固态发酵生产酸性β甘露聚糖酶

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1、第$+卷第$期生物技术9<="$+，C<"$+((+年+月6RD_OA;CD0DXTWK]"+((+""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""［!］岳文斌，康俊卿，郭栋生，等"高锌日粮对蛋鸡生产性能和蛋锌含量+"+凝血酶的离交分离和纯化：通过!+,离子交换树脂柱对的研究［#］"营养学报，$%%&，$（!’）：’()*’$$"获得的凝血酶粗酶液进行了分离纯化，洗脱图如图$所示，图猪血凝血酶的制备中自左向右的三个洗脱峰依次为穿过离交柱的杂蛋白峰，洗施大林，陆茂林，吕惠敏，陈金林脱下

2、来的杂蛋白峰和凝血酶峰。（江苏省微生物研究所，江苏无锡+$,(-’）由洗脱图可以看出，通过!+,离子交换树脂可以使杂蛋白摘要：从猪血制备凝血酶，对丙酮沉淀法和离子交换树脂和凝血酶很好地分开，且凝血酶出峰较集中，从而可使凝血酶法进行了比较，结果表明，两种方法的得率分别为+’((./0和的纯度大大提高。&-((./0，酶比活分别为$&./12和’-"&./12。关键词：猪血凝血酶；制备+"’丙酮沉淀法和离交树脂法的比较：丙酮沉淀法和离中图分类号：3)$,"$文献标识码：4文章编号：$((,*’$$5（+((+）($*((+-*($猪血凝血酶是近年国内研究开发的一种新

3、型速效局部止血药，止血机理是促使血液中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，同时促使血小板聚集，加速血液凝固，达到迅速止血的目的。国外对凝血酶的研究较早［$］，产品主要是人血凝血酶，本文报道了离子交换树脂法从猪血制备凝血酶的新工艺。$材料和方法$"$材料$"$"$新鲜猪血：采自无锡市食品公司。图$凝血酶离交柱洗脱图$"$"+试剂：凝血酶标准品：中国药品生物检定所；牛纤维蛋子交换树脂法制备凝血酶，两种方法的工艺和凝血酶得率及白原；中国药品生物检定所；冻干人纤维蛋白质；卫生部上海比活比较如表+。生物制品所；!+,离子交换树脂；上海树脂厂；其它试剂均为分+",结论：从猪血制备凝

4、血酶，国内报道较少。本文得出的制析纯。备凝血酶的最佳工艺条件为：血浆稀释%倍后等电点沉淀，沉$"$"’仪器：紫外分光光度计89*$%(，日本岛津公司；酸度淀以$(@ABA=+激活，激活后获得的凝血酶粗酶液离子交换树计:;7*+&，上海雷磁仪器厂。脂分离纯化，收集凝血酶活性峰制得凝血酶成品。从本文的$"+方法结果看，采用离子交换树脂法从猪血制备凝血酶，避免了有机$"+"$凝血酶粗酶液的制备：新鲜猪血，高速离心机低温离溶剂沉淀造成的酶失活，并且去除了大量的杂蛋白，使凝血酶心，弃去血细胞，收集血浆，血浆以去离子水稀释，+1<=/0醋酸的得率及比活都有了较大的提高，离交

5、树脂法的得率和比活溶液调节>;&"$，,?静置过夜，虹吸去上层清液，离心收集凝均为丙酮沉淀法的+",倍。血酶原沉淀；沉淀以缓冲液溶解，以$(@ABA=+溶液激活，过滤参考文献：收集滤液即得凝血酶粗酶液。［$］A;G;HIF"JKLM

6、［’］中华人民共和国药典委员会"中华人民共和国药典［J］"北京：化$"+"’凝血酶干粉的制备：上述粗酶液以$1<=/0;A=调节学工业出版社，$%%&，$$+)*$$+%">;至&"$，离心弃沉淀，上清以$1<=/0的CBD;调节>;至-",边搅拌边加入’倍体积的冰丙酮，,?静置过夜，次日收集沉黑曲霉固态发酵生产酸性!*甘露聚糖酶淀，沉淀以无水乙醚洗涤，置真空干燥箱真空干燥，即得凝血李江华，邬敏辰，房峻，邬显章酶粗酶粉。（江南大学生物工程学院，江苏无锡+$,(’-）表$血清稀释度对酶活的影响摘要：以黑曲霉G4’($为生产菌固态发酵生产酸性!*稀释度（倍）&!%$

7、(甘露聚糖酶，较适的培养基组成和培养条件为：麸皮$(2，魔芋酶活性（./1=）$$)$-&$))$)%粉(",2，豆饼粉$"&2，硫酸铵("+2，起始湿度&&@，>;自然，发表+丙酮沉淀法和离交树脂法的比较酵温度’&?，发酵周期约%-M。在此条件下，G4’($的酸性!*得率!（./0）酶比活（./12）工艺周期（E）甘露聚糖酶产率为%&(8/2干曲左右。丙酮沉淀法+’(($&,关键词：固态发酵；酸性!*甘露聚糖酶；黑曲霉离交树脂法&-((’-"&+中图分类号：3&&-文献标识码：4文章编号：$((,*’$$5!得率为每升猪血所获得的凝血酶（+((+）($*((+

8、-*(’从表$看，血清稀