枯草芽孢杆菌（bacillus+subtilis）wy45产β甘露聚糖酶的纯化与性质研究

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1、中国农业大学硕士学位论文枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）WY45产β-甘露聚糖酶的纯化与性质研究姓名：柴萍萍申请学位级别：硕士专业：食品科学与工程指导教师：李里特;江正强20050601中田农业大学碗士论文中文摘要摘要本文研究了通过筛选得到的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)WY45产甘露聚糖酶的发酵条件，并对其所产甘露聚糖酶进行了分离纯化．同时对纯酶的酶学性质进行了研究。主要结果有：1．枯草芽孢杆菌(Bacillussubdlis)WY45液体发酵产生甘露聚糖酶。发酵培养基经优化后，在4％的魔芋稽粉为碳源．1．33％1的大豆蛋白胨为氮源，初始pI-1

2、5．5。50℃培养96h的条件下．该菌产酶韵酶活从初始的204u／rat提高到2800u／ml，优化提高了13．7倍．优化效果明显，且该酶活水平为现在已报道的同类酶中的最高水平。2．枯草芽孢杆菌(Bacillussub脓)WY45产甘露聚糖酶经60-90％硫酸铵沉淀，S-100凝胶过滤层析，QSFF离子交换层析等分离纯化步骤后得到电泳纯的纯酶，最终纯化倍数为6．鸺，酶活回收率为19．80％，经SDS．PAGE电泳测定该酶的分子量为44．47kDa。3．pll对该甘露聚糖酶活力的影响很大。该酶的最适反应pH为6．o，在5．5-6．5的范围内，酶的相对活力都在∞％以上；当pH低于5．0

3、和高于9．0对，活力显著下降。在40℃下，酶在所采用的p[45．o-11．0的范围内都根稳定。该酶的最适反应温度为65℃，大于65"C酶活力即迅速下降，70℃时酶活力水平已低于l矾．大多数金属阳离子对该酶活力有提高的作用，特别是C02．和Ni+．关键词：甘露聚糖酶，枯草芽孢杆菌WY45，发酵条件，纯化与性质，魔芋粉中国农业大学硕士论文英文摘要Abstract6-manannaseisallenzymecapableofhydrolyzingB-1,4-D-manno-pyanosyllinkagesofglucomannans,yieldingmanno-oligosacchari

4、desthathavethemarkedeffectontheproliferationofBifidobacte—a．BacillussubtilisWY45wasisolatedfromsoilsamples，whichcanproducehighactivityofextraceellularB-manannase．Themaineesearchcontentsofthisthesisincludethefollowing：optimizingthecuRureconditionsofthefermentation，purifyingtheB-manannaseproduce

5、dbyBacillussubtilisWY45andfindingoutthemaincharacterizationsofthepurifiedenzyme．Theresultsshowedthat：1．BacillussubtilisWY45grewbestwhenculturedat50℃withthemediumcomposedof4％konjacpowderaScar-bonsoarr=c，1．33％soyapeptoneasnitrogenSOUrCO，andadjustingpHto5．5．After96hoursculturing，theenzymecouldsho

6、wthehighestactivityas2800u／mlanditisthehighestvalueasfarasnow．2．TheB-manannasewaspurifiedtohomogeneRybyammoniumsulfatc(60-90％)precipitation，SephacrylS·100gclfiltrationchromatographyandtheQ-sepharoseionexchangecbdomatogramphy．InSDS-PAGEasingleproteinstrip啪beseen．Themolecularweightofthepurifiede

7、nzymeWas44．47kDa．；．TheenzymeWassensitivetothetemperatureandpH,andthemaximumenzyme。activityexistedat65"C，andtheoptimizedpHWas6．0．ItWaSstableatpH5．5·6．5，below50"(2．Mostmemalionscouldenhancetheenzymeactivity,espeeianyC02．andNi+。Keywords：ma