枯草芽孢杆菌wy34产甘露聚糖酶及其激活剂性质的研究

《枯草芽孢杆菌wy34产甘露聚糖酶及其激活剂性质的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中国农业大学硕士学位论文枯草芽孢杆菌WY34产甘露聚糖酶及其激活剂性质的研究姓名：韦赟申请学位级别：硕士专业：食品生物技术指导教师：江正强;李里特20060601摘要本文针对枯草芽孢杆菌(BacillusJ“6枷J)WY34所产甘露聚糖酶进行了一系列研究，包括固体发酵条件的探讨、蛋白纯化及酶学性质等，并第一次探讨了该甘露聚糖酶激活蛋白的纯化及其对该酶部分酶学性质的影响。主要内容和结论如下：1．枯草芽孢杆菌WY34固体发酵产甘露聚糖酶的最佳培养条件为：麸皮5g，初始水分含量71％，初始pH7．0，接种量2mL，l

2、％Tween{O，0．49魔芋粉，培养温度50。C。在最适条件下培养5d，甘露聚糖酶酶活高达7650U／g干基，是未优化前酶活的2．78倍，且该酶制剂仅有微弱的纤维素酶和木聚糖酶活力。2．通过盐析、凝胶过滤及离子交换层析，得到SDS．PAGE电泳纯的甘露聚糖酶，经PAS染色被证实为一糖蛋白，纯化过程酶活回收率20．3％，纯化倍数为5．4倍，分子量为39，6kDa。3．对枯草芽孢杆菌WY34甘露聚糖酶的酶学性质研究得出：该酶反应的最适pH为6．0，在pH5．5．10．1范围内稳定；反应最适温度为65"(2，在温度

3、不高于60"(2条件F均比较稳定。Mn”、EDTA、Mg”Ag+、I}-巯基乙醇与SDS对该酶有强烈抑制作用，化学试剂N-bromosussinimide(NBS)则完全抑制了该酶活性；Fe2+和co”则对该酶有激活作用。该酶对不同底物都表现出一定的水解能力，其中以槐豆胶为底物时酶活力最高，魔芋粉次之，而对椰子甘露聚糖和瓜尔豆胶则相对酶活力较低。该酶对非甘露聚糖底物如淀粉、CMC(CarboxymethylCellulose-Na)、桦木木聚糖也有微弱活力。三种天然底物槐豆胶、精制魔芋粉及瓜尔豆胶的Jo分别是7

4、．6±0．2、10．5±0．6和27．4±2．5mg／mL。该酶对椰子甘露聚糖的水解产物主要是甘露四糖、甘露三糖和甘露二糖，而对槐豆胶则产生了一系列不同聚合度的甘露寡糖。该酶几乎不能水解甘露三糖及甘露二糖，但能缓慢的水解甘露四糖。该酶水解甘露五糖产生甘露四糖、甘露三糖和甘露二糖。该酶对中性蛋白酶和胰蛋白酶的攻击有一定的抵抗能力。4．枯草芽孢杆菌WY34产的甘露聚糖酶激活蛋白通过硫酸铵沉淀和DEAE-52离子交换层析两步基本达到电泳纯，纯化倍数达18．4，回收率为25．9％。在SDS．PAGE上测得分子量为64．

5、59kDa。5．当激活蛋白与枯草芽孢杆菌WY34甘露聚糖酶以2：1(w／w)的比例混合时，甘露聚糖酶活最高，：37*C为该激活剂最适作用温度：加入激活剂后，甘露聚糖酶最适温度及其温度稳定性均没有明显变化，但其最适pH降低了o．5个单位，pH稳定范围拓宽；在相同条件下水解36h，加了激活剂水解得到的产物与对照相同。该激活剂对大肠杆菌重组的甘露聚糖酶及甘露糖苷酶没有明显作用；使真菌拟青霉J18及放线菌117号所产的木聚糖酶活力略微增加，效果很不明显：对拟青霉J18所产木糖苷酶有显著的抑制作用。关键词：枯草芽孢杆菌，

6、固体发酵，耐热甘露聚糖酶，纯化，酶学性质，激活蛋白AbstractAthermostabte1TlalxnarlB,seanditsactivatingprominfromBacillussubfilisWY34wereinvestigatedinthepresentpaper．Thisisthefirststudyofamannanaseactivatingprotein，includingitspurificationandeffectonthepropertiesofmannanase6ⅫmBacillu

7、ssubtilisWY34TheeffectsofdifferentfactorsonmannanaseproductionbyBacillussubal括WY34insolid-statefermentationThehighestmannanaseactivitywas7650U／gdrymatteratthe50daywhenthefollowingconditionswereused：wheatbran5g，initialmoisturecontent71％，Tween-801％，konjacpowde

8、r0．4g，initialpH7．0，incubationtemperature50℃．Enzymeproductionwasincreased178％afteroptimization．PurificationoftheeulturefiltrateofBacillussubtilisWY34Mannanasewaspurified5．4-foldtohomogeneitybyamm