nd病毒在免疫鸡胚中增殖条件优化的研究

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1、·54·"瞠至全垦璺堕堂生塑j5：譬垄至盒堡塞基(‘：：．，。”。ND病毒在免疫鸡胚中增殖条件优化的研究*张兴晓沈志强特耐文{l吉【u传可j』罕丙更山东肯滨州畜牧兽睡：研究所滨"25661‘；·儿J尔省盲禽用蜱腔疫苗研究开发推广中心薄州256618摘要ND病毒的增殖-￡母j}扛体、擂新

2、曲、1a齐时归I、授稃剂量、种毒、妒毒的稀释篇数、蛘7t石定、‘p化温爱等囤末的影，q。通t±对NIJ病寺矿聋，墁鸡肥中增殖条件。由洗化配置，1《ND病垂j目硅声条件趋亍稳《的盾，EI：其产量与噶i．砷』j，磺效，『~if达到比玻理恕自i嫂果．关键词ND免《z

3、5桎增碴蝇绰每#慧ft,目前用于生物制品钡城的田想鸡胚为SPI·鸡胚．这种鸡幔不舍有玛22种病原体．uJ以用r各种禽病毒的分离培养和疫苗的制备㈠．，1l由于SPF鸡的饲养杀件严措，价惜昂贵，商品比种匿供不直求．故制备新城疫灭活疫茁多采用非免疫码胍。胆这仲鸡胚应兀ND病源的母源抗体．厅则会影晌Yn病毒在鸡旺内的增殖。住规模化饲养的条f牛F，由于受到外在环境千口内在刚素的影Ⅱq，坞场破ND痫毒侵袭的可能性加大．而玛场为侏护率场的利益常常要对鸡群进行免疫，从f而导致其’}．产的鸡胚中仁在ND抗体．敦使ND痫毒的增殖壁到影响、N】)炳毒的增殖除受母源

4、抗体影响外．接冲R龄、培养时闹、接种剂量、种毒、种毒的稀释倍数等区末对ND病毒也有‘定的影#向，冈此如何使用扑种l划素优化酣置。达到病毒增殖槛大化+成为兽医生物制{^生产c卜急需解决的问题。为此．我们对ND病毒在免疰呜胚中增殖条件进行了优化研究。取得7良好效桀，兹报告如I：。1材料与方法￡．1矿刊l1．1坞旺I(】H龄i；胚阿批购冉山东省某农场。1．1．2ND克隆30株由4。所但俘，血凝效价为]21092。1_131×红细胞浊由本所眦削。j．2方杰1．2．1母源抗体水平的删定鸡肛共两批，g-61o枝。从每批随机抽取10枚鸡胍进行Hl试盐删定抗

5、体水甲分别为31092～510921j7[092～91092。】．2．2种毒稀释将NI)种毒分别以100、1000、5000、l0000、20000、40{)00等不同屿倍数稀释。2．3援种剖培每枝坞胍接种02m1种毒稀释液。1．2．{接种组数及枚数鸡肛收据母源抗体水下的高低分A(31092～51092)．B(ro醇～910923两组．每一组按照科·毒稀释嚏分为61、稀释度．每稀释度100枝鸡胚，1．25培养孵化温度为37C～38c、湿度分别为A组j3如i．B组63“1．26收获u寸晒j分别于72小时、96小时各收获100枚活胚的尿囊液，并于

6、12n，】、时收获所有的衍胚尿囊液。存子时间段间时收特：呃肛的尿囊液，单独放置。1．2．7IIA试验分别测定7：小时、96小时、120小时活、死幢尿囊液m凝效价。2结果2l接砷100+岭A组鸡越结‘*扫’j表3分析与讨论3利用t检验法副表一进行数据处州，所收获的埭囊液在各稀释度之间差异不显著，在各时问段中，20小叫与96小时、72小时之1可差异显著；血凝效价r检验表明存1⋯)00倩稀释度与100、1000、40000倍之间差异显菩，‘j3000、20q(倍：兰问差异不显著；在苦个时间段对血错教价的位聆丧明，l20小时与96小时、77小时差异硅

7、旨。3．2刊用t掩验法对表二进钉数据处理．所收获的尿囊液在筹鼯释度之：旬无显著差异．在旨时间段也尢显著差异；『『fL龌效价t倚验表明51)00倍稀释度与100、1(／00、200州、A)OO／I俯之间蔗异显著，而,5000倍与l000倍之【hj整异水显著；在子个时问段对血凝效价的检验表明．96小时与72小时差异显著。3．3拄种10口龄的鸡旺，在雌源抗体较低的情况F(31092，51。92)，随营孵化时问的延长．无论是尿囊液、还是m凝放价都随之增多印升高，井且鸡胚的!!!!生全国璺匿塑皇塑芏堂查王金堡塞墨成活率也较高。另外．孵化至i20小时后1

8、00倍稀释组活胚率为76％的原因可能是由于弱胚或污染所致。在该试验中可以得到以下结论：①当母源抗体水平较低时．种毒稀释倍数以5000～20000倍较理想；·55·②孵化时间应维持到i20小时，此时，无论屎囊液含量还是血凝效价都H{现一极值；③若接种的种毒量过多，会弓l起鸡胚尤其是弱胚的提前死亡．导致『

9、iL凝效价偏低。表1ND病毒增殖“’TablethemuItIplIcationOftheNDViros尿囊液量(m1)theallantoicfluid(m1)72小时挚似Log)(hours)死胚(枚)。thedeadembryos(num

10、bers)活胚(枚)11．0101110．078thelivingembryos(numberH)89939496尿囊灌量(m1)theallantoicfluid