黄背木耳多糖对巨噬细胞的激活作用

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1、维普资讯http://www.cqvip.com中国食用菌2008，27(3)：41-42，49CN53—1054／QISSN1003-8310EDIBLEFUNGIOFCHINA黄背木耳多糖对巨噬细胞的激活作用许晓燕，余梦瑶，一，罗霞，清源，江南，曾瑾，．，郑林用’(1．四川省中医药科学院中药细胞与分子生物学实验室，成都610041；2．四川大学生命科学院，成都610064；3．四川省农科院，成都610066；4．成都中医药大学，成都6l1137)摘要：通过中性红吞噬法、GrieSS法、ELISA法检测黄背木耳多糖增强巨噬

2、细胞的吞噬作用，提高生成NO的能力，促进细胞因子的分泌。黄背木耳多糖能够有效地激活巨噬细胞，可能是其抗肿瘤作用的主要机制。关键词：黄背木耳多糖；巨噬细胞；吞噬作用；NO；细胞因子中图分类号：$646．6文献标识码：A文章编号：1003—8310(2008)03—0041—03本文对从黄背木耳子实体中提取的多糖的巨噬细胞激96孔细胞培养板中．分别加入各浓度的APPIIA和10tzg·活作用进行了研究．以期对其抗肿瘤作用机制进行部分阐mL的LPS，补充培养液至200tzL。培养24h后，弃去培明。养液并以PBS洗涤2次，加入lm

3、g·mL的中性红生理盐1材料与方法水溶液，继续培养30min。倾去上清液，用PBS洗3遍，1．1材料每孔加入细胞裂解液(乙醇：冰醋酸：1：1)100tzL，室温下1．1．1细胞放置2h～3h．待细胞溶解后．在酶标仪上测定540nm出吸小鼠巨噬细胞株RAW264．7购自ATCC(编号ATCC光度。TIB一71)，培养于含10％胎牛血清的DMEM培养液中(含1．2．2N0的测定100tzg·mL。青霉素，100tzg·mL链霉素)，置于37~C，NO不稳定．采用Griess法旧对NO-2定量间接反应NO5％CO细胞培养箱中，每隔

4、2天传代1次。生成。为排除酚红对本实验的影响，本实验中以无酚红1．1．2试剂DMEM培养液进行实验。1×10个对数生长期的DMEM培养基和无酚红DMEM培养基(Gibco公司)，RAW264．7细胞接种于24孔细胞培养板中，并加入各浓度胎牛血清(Hyclone公司)，脂多糖(LPS)(Sigma公司，的APPIIA和10tzg·mL的LPS．补充培养液至lmL。置于055：B5)，ELISA试剂盒(R&D公司)。其他试剂均为国产培养箱中培养48h后，以NaNO作标准曲线，对清液中分析纯。NO含量进行测定。100L上清液中加入

5、等体积的Griess1．1-3黄背木耳多糖试剂(1％磺胺，0．1％盐酸萘乙二胺，2．5％磷酸)，室温下黄背木耳多糖由本实验室提取。来源为产自四川省中反应10rain，酶标仪上测定540nm处吸光度。江县菌株781干燥子实体。经水提醇沉、Sevag法1I除蛋白1．2．3IL一1B，IL一6，TNF—的澳4定后得到粗多糖，再经DEAE纤维素和SephacrylS-300层析1×10个对数生长期的RAW264．7细胞接种于24孔细得到。经S-180荷瘤小鼠筛选，得到具有抗肿瘤活性的多胞培养板中．并加入各浓度的APPIIA和10tz

6、g·mL的糖组分，命名为APPIIA。APPIIA溶于一定量细胞培养液LPS，补充培养液至1mL。置于培养箱中培养48h后，去中，过滤除菌，一20℃分装保存。t清液进行测定。IL一1B，IL一6，TNF—的测定采用ELISA1．1-4仪器试剂盒进行，实验操作按说明书进行。MuhiskanAscen酶标仪(美国Thermo公司)，细胞培1-3数据处理养箱(德国Heraeus公司)。实验结果以表示．组问采用t检验。1．2方法2结果1．2．1巨噬细胞吞噬中性红能力2．1APPIIA对巨噬细胞吞噬作用的影响取对数生长期的RAW264

7、．7细胞按每孔1×10个加入以吞噬的形式将胞外物质纳入细胞内是活化的巨噬细作者简介：许晓燕，女，辛要从事菌物药研究。通讯作者：郑林用，男，研究员，四川省农科院。E-maihzly6559@tom．corn收稿日期：2007—12—25维普资讯http://www.cqvip.com42中国食用菌EDIBLEFUNGIOFCHINAVol_27No．3Ei＼0zI．，OI●O●A54l2l曩约●．6巨=0ln《●50lO口2∞388488LPSlODSD0020O{00400工’g0Concentration／l~g·mLC0

8、ncentrati0n／g·mL-图1不同浓度APPIIA对巨噬细胞吞噬作用的影响BFig．1EnhancedphagocytosisbyAPPIIA胞的重要的效应反应。通过观察巨噬细胞对中性红的吞噬作用，可以发现APPIIA对巨噬细胞吞噬作用有明显的促进，并呈剂量依赖关系，在2001~g