毛木耳多糖的分离,分析及免疫药理活性的研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com中国药科大学学报JournalofChinaPharmaceuticalUniv~rsity1991；22(2)：97—10097毛木耳多糖的分离、分析及免疫药理活性的研究吴春敏陈琼华(生物化学研究室)摘要毛木耳子实体经热水提取，Sevag法去蛋白，乙醇沉淀，得到毛木耳多糖(APP)APP经Sephadcx0—100柱层析，得到APP—A和APP—B两种多糖，经电泳鉴定均为单一区带，分子量分别为l2万和7万，糖含量分别为68．33和66．74，糖醛酸含量

2、分别为15．96和15．58APP-A单糟组成摩尔比，岩藻糖l木糖l甘露糖l葡萄糖为0．05：0．18：3．20*1．00，APP-B为0．06-0．16l4．D1{1．00200～400mn紫外扫描，无核酸和蛋白质吸收峰4000~650era-红外扫描，呈多糖类特征吸收峰原子吸收光谱分析表明，APp含多种对机体有益的微量元素。APP可增加小鼠脾指数，小鼠碳粒廓清率，增加巨噬细胞的吞噬功能，促进小鼠血清溶血索的形成，对大鼠红细胞有明显的凝集作用关键词毛木耳；多糖；免疫毛木耳多糖(APP)系从担子菌纲银

3、耳科毛毛木耳经80"C左右热水提取，Seva$法去蛋木耳(Aurk-damP，自Sate)子实体中提取。毛白，流水透析，减压浓缩，加5倍量95乙醇沉木耳易栽培，其功用同黑木耳，是一种价格低廉淀，脱水干燥得到毛木耳多糖半纯品(APP)。的食甩菌”。本文将介绍对毛木耳多糖的分离、APP上SeplmdexO-lO0柱(2．5em×45cm)，0．分析及免疫药理活性的初步研究。1mol／LNaa洗脱，分部收集，每管收集3．7nil，流速0．25ml／min，硫酸一酚法监测。结果呈现两]实验材料个洗脱峰APP-

4、A和APP—B。见图1。毛束耳福建省农科院提供，经鉴定为#ichaSaee．仪器岛津uv-300；岛津IR一400，岛津APP—AGc—RIA气相色谱仪，岛津AA一670G，GFA一4B原子吸收光谱。试剂Doxtran标准品，SephadexG一1O0，G一200(Pharmaeia)；岩藻糖(ColnbrookBerksEngland)；木糖(E．Merck．Darmstadt)；半乳糖、阿拉伯糖、糖醛酸(上海试剂二厂)；阿利新兰8GX(上海化学试剂分装厂)。动物体重18～22g昆明种小鼠，150～

5、200gSD大鼠，均由本校动物室提供。2方法与结果Fig1．a啪mat0Br丑phyonS．DphadcxG-100orAPP2+l毛束耳多糖的分离和分析2．1．2理化分析2．1+1分离和纯他2．1．2．1纯度鉴定采用聚丙烯酰胺凝胶电收稿日期1990-09—26维普资讯http://www.cqvip.com98中国药科大学学报泳Ⅲ凝胶浓度为5，缓冲液为0．025mol／L件测Ve。结果见图2。APP-A和APP—B的平均pH9．0的硼砂液。每管进样40峙，电流量约2分子量分别为l2万和7万。mA，电

6、泳2h，阿利新蓝染色。结果表明，APP—A和APPB均呈单一区带。2·2．1．2．2紫外和红外分析APP—A和APP—1．B，紫外扫描，在260rim和280nlTl处未见到蛋白质和核酸的特征吸收．4000cm～650C1TI兰-红外扫描，具有多糖类物质的特征吸收，8101-ClTI和870C1TI处有甘露糖的特征吸收，8401·^CITI处有吸收．提示主干可能为糖苷键。2．1．2．3单糖组成及其摩尔比测定取样品APP—A和APP-B各5mg于安瓿中，加入2mol／L三氟乙酸1ml，封VI．100~：

7、水溶水解8h，过滤除去水解液中的残渣，减压浓缩至干．以Fig2．Ttte／lllct[t~,llew~iglatdetea-mtn~olaofAPP-Aand^PP—Bon蒸馏水洗涤5次，除去三氟乙酸。向水解物中加sE叫d麟G一200gduehtomat~lly八几滴蒸馏水及硼酸钠5mg，室温还原3h，加2．1．2．5含量分析硫酸一酚法[3测糖含量，入阳离子交换树脂732H至无气泡为止。过滤硫酸一咔唑法[测糖醛酸含量。APP、APP-A和后减压浓缩，以甲醇洗涤5次，减压浓缩至干。再APP-B糖含量分别

8、为54．81、68．33和66-加入数滴醋酸酐和吡啶，100~：油浴回流2h，以74，糖醛酸含量分别为14．45、15．96和蒸馏水洗涤减压浓缩至干除去醋酸酐，再以甲l5．58。微量元素测定采用ShimadzuA670苯洗涤减压浓绾至干除去吡啶。还原乙酰化衍G，GFA一4B石墨炉火焰原子吸收光谱法。结果生物溶于2ml氯仿中，进行气相色谱分析。色见表1。谱仪为岛津GC-R1A气相色谱仪，填充柱5Tab1．Theo∞tbofn眦erneninAI．POV一2