乙肝六项操作及检验结果的解释课件

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1、乙肝六项的操作、注意事项及检验结果的解释乙肝六项操作HBSAg(双抗体夹心法）原理在微孔条上预包被，被纯化的乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。乙肝六项操作HBSAg(双抗体夹心法）操作步骤一.准备1.1平衡：将试剂盒各组分别取出，平衡至室温（18-25℃），1.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按25倍稀释后使用。1.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。乙肝六项操作H

2、BSAg(双抗体夹心法)二.HBSAg操作2.1加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各75l于相应孔中。2.2温育：置37℃温育60分钟。2.3加酶：不用洗涤，分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻轻混匀。2.4温育：置37℃温育30分钟，室温平衡5分钟。2.5洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。2.6显色：每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处30分钟。2.7终止：每孔加终止液50l，混匀。三.HBSAg测定用酶标仪单波长450nm或双波长450/630

3、nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。乙肝六项操作HBSAg(双抗体夹心法)结果判断与分析临界值（C.O.）的计算：Cutoff临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.05时按实际OD值计算，小于0.05时以0.05计算。结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为HBsAg阳性样品OD值S/C.O<1者为HBsAg阴性乙肝六项操作HBeAb检测（ELISA)竞争法一.试剂准备同上二.HBeAb操作加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应

4、孔中。加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻轻混匀。温育：置37℃温育30分钟，室温平衡5分钟。洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。显色：每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。终止：每孔加终止液50l，混匀。三.HBeAb测定用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。乙肝六项操作HBCAb测定（竞争法）试剂准备同上加样：每测定孔加入50l样品。对照孔中加入阴、阳性

5、对照血清各50l。作为临床诊断依据，必须将原倍血清样品按1：30稀释后再检验，稀释液应采用生理盐水；（作为流行病学调查依据，使用原倍血清检验）。加酶：每孔加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。育温：置37℃温育30分钟，室温平衡5分钟。洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。显色：每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处30分钟。终止：每孔加终止液50l，混匀。测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成

6、测定，并记录结果）。结果判断与分析临界值（C.O.）的计算：临界值＝阴性对照孔OD值N×0.5（未稀释临界值＝阴性对照孔OD值N×0.3）结果判定：样品OD值S/C.O<=1者为HBcAb阳性样品OD值S/C.O>1者为HBcAb阴性注意：加底物显色，显色的强弱与待测标本中HBCAb的含量成反比。乙肝六项操作HBCAb-lgM(捕获法）测定原理采用兔抗人HbcAg-IgM包被固相载体反应板，加入待测标本，同时加入HbcAg-HRP，当标本中存在HbcAb时，该HbcAb-IgM与包被HbcAg结合并与酶结合形成HBcAg-H

7、bcAb-HBcAg-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。乙肝六项操作HBCAb-lgM(捕获法）操作步骤1.待测样品用生理盐水作1:1000稀释，每孔加人稀释样品100微升，设阴、阳性对照各2孔，每孔加人阴性对照(或阳性对照)各100微升(或2滴)，并设空白对照1孔，封板，置37℃孵育20分钟。2..手工洗板:弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复3次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤3次程序洗板后拍干。3.每孔加入HBcAg30微升(或1滴)，酶结合物50微升(或1滴)(空白对照孔除外)，

8、充分混匀，封板，置37℃孵育20分钟4..手工洗板:弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。洗板机洗板:选择洗涤5次程序洗板后拍干。5..每孔加显色剂A液，显色剂B液各50微升(或l滴)充分混匀，封板，置37`℃孵育10分钟。6.每孔加人终止液50微升(或1滴)，混