ELISA法对乙肝六项检测结果的影响及处理对策.pdf

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1、·83·第29卷第1期实验与检验医学Vol.29No.12011年2月EXPERIMENTALANDLABORATORYMEDICINEFeb.2011·经验交流·ELISA法对乙肝六项检测结果的影响及处理对策谢璟，崔江龙，王宏碧，李健，卢雪(江西省宜春市人民医院检验科，江西宜春336000)中图分类号R446.61,R512.6+2文献标识码B文章编号1674-1129(2011)01-0083-02doi:10.3969/j.issn.1674-1129.2011.01.043关键词：酶联免疫吸附试验；乙型肝炎3操作技术的影响酶联免疫吸附试验(简称EL

2、ISA法)检测乙型肝炎(下称3.1加样吸嘴的洁净和吸液量的准确性直接影响结果，移乙肝)免疫学标志物问世以来，由于测定灵敏、特异和操作简液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸头内壁挂液太多或内便等诸多优点，具有实用性和可操作性，广泛应用于各类医壁不清洁，所以要定期校正移液器，吸头要配套，每次装吸头院实验室，作为检测乙肝血清标志物的首选，但通过对临床要吻合紧密。移液不宜过快，排放应完全。尽可能使用同一移乙肝六项检测的观察，存在不同血清物质变化及各种影响因液器和装紧吸头移液时用力及抽吸速度均匀一致，加样后要素，直接或间接的影响检验结果的正确表达，本文综合资料充分混匀

3、。在100μl和50μl的移液不精密度应≤1%，分别在和实践，作如下报告：99～101μl和49.5～50.5μl之间。1样本的采集与处理影响3.2温浴影响。96孔酶标板结构特别，易产生边缘效应，抗1.1样本离心处理不全，使得标本严重溶血及混有红细胞原抗体结合及酶促反应对温度要求严格，标本要贴好密封的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净，残留在孔内的膜，防止水蒸气和污物浸入，放置37℃水浴箱时，应让反应孔血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳底部2/3浸入水中，才能减少受热不均，避免边缘效应，干浴性，溶血标本禁用。与水浴存在明显的差异，尽可能

4、使用水浴，并控制好水浴时1.2正常血液采集后半个小时至两小时开始凝固，有时工间。作中为了快速检测，常会在血液未开始凝固时，即强行离心3.3洗涤是ELISA法操作的重要环节，洗涤液的配制要严分离血清，特别是在冬天，使得血清中残留部分纤维蛋白原，格按照说明书进行操作，不能用自来水代替蒸馏水配制，因在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白凝块附为自来水中的次氯酸钠会影响结果。手洗易交叉污染，尽量着在酶标反应孔壁内使得不易洗掉，易造成假阳(阴)性，影响使用洗板机洗涤，血清中残留的纤维蛋白或洗涤瓶未经常清结果。因此血液标本采集后要使其充分凝固后再分离血清，洗

5、而留有的污垢、结晶易使洗板机针孔全堵塞或半堵塞，造标本离心时，可加大离心转速，延长离心时间，或者要节约时成未结合标记酶洗脱不彻底，导致花板而造成假阳性或假阴间就用带分离胶的采血管采集标本。性。所以操作洗板机过程中要不时观察洗板机针孔内洗液的1.3血清标本应避免细菌污染，细菌的一些内源性酶本身通畅情况，及时纠正调整，洗板机要做好维护保养，不用时应会对相应酶作标记测定方法产生干扰。用去离子水清洗几遍。1.4标本储存时间不宜过长，应新鲜，4℃保存不宜超过五3.4显色剂应避光保存，滴加显色剂A、B时，顺序不能颠天，以免因标本中的IgG聚合导致本底加深，甚至假阳性，

6、影倒，注意不要漏加，显色时间要严格控制，可用计时器来计时响判断。保证准确。肉眼判断结果时，显色浅不易观察，影响结果准确2试剂的影响性，必须使用酶标仪检测结果，以保证结果一致性。滴加终止2.1试剂盒在运输中时间太长，温度过高会使显色偏淡，液后随着时间的增加，吸光度值逐渐下降，而且浓度越高其灵敏度偏低，要求试剂盒应存放于2～8℃，从冷藏环境中取出吸光度随时间下降越快，可能会产生假阳性或假阴性结果，的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需的微孔反应板应建议在终止反应后立即比色[2]。预先在室温下平衡后再开启使用，余者应及时封存于冰箱。4钩状效应(Hook)影响不同批

7、号试剂盒中的组份不能进行交叉使用，包括试剂瓶盖随着ELISA一步法的应用，在日常工作中会发现HBsAg相互交叉使用，有可能出现显色浅或本底高、花板情况，所以阴性而HBeAg阳性的现象，其原因就是当标本中的抗原浓不同试剂瓶盖不能混淆。试剂盒不要使用超过有效期。度过高时产生的钩状效应(Hook)现象，从而出现假阴性造成2.2不同厂家出产的试剂特异性和敏感性不相同，有的厂真阳性的漏检，即随着被测物浓度增高反而显色减弱甚至不家酶标板空间A值差＞15%，标记酶活性及显色液的稳定性显色，往往造成假阴性结果。采用同步稀释测定或用线性范较差[1]。使用劣质试剂必然导致结果

8、的假阳性或假阴性，选择围高的乙肝六项定量法可以减少Hook效应的发