马铃薯腐烂茎线虫特异性分子检测技术研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com植物病理学报ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA38(3)：263-270(2008)马铃薯腐烂茎线虫特异性分子检测技术研究宛菲’。，彭德良h，杨玉文，何月秋(中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害国家重点实验室，北京100193；云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室，昆明650201)摘要：本研究利用通用引物(rDNA1／rDNA2)研究了21个国内甘薯茎线虫(Di~lenchusdestructor)群体和1个韩国马铃薯茎线虫(D．destructor

2、)群体的rDNA—ITS序列，从21个国内群体中扩增出2个大小不同的ITS片段，分别约为940bp和l100bp；经克隆、序列测定和分析比对发现其ITS区存在特异性差异，分别命名为A型和B型，其中l8个群体DdTH、DdCL、DdJNDdMY1、DdYX1、DdZZ、DdLN，DdDX1DdFNDdYX2、DDSX1、DdDX2、DdXYDdLL、DdSX2、DdLYDdMY2和DdPY的ITS扩增产物约为940bp，称之为A型马铃薯腐烂茎线虫(940bp)，3个群体DdSH，DdTS，DdYS为B型马铃薯腐烂茎线虫(1100bp)。设

3、计构建并筛选出A型和B型马铃薯腐烂茎线虫2对特异性引物DdS1／DdS2和DdL1／DdL2，分别扩增出A型马铃薯腐烂茎线虫、B型马铃薯腐烂茎线虫群体的特异片段252bp和485bp；引入D3A／D3B作为内标，设计出一步双重PCR检测技术；同时优化了检测体系和PCR反应程序。该技术具有较高的特异性和灵敏性，能快速、准确地检测出不同型的马铃薯腐烂茎线虫群体。关键词：马铃薯腐烂茎线虫；双重PCR；特异性引物SpeciesspecificmoleculardiagnosisofDitylenchusdestructorpopulations

4、occur—ringinChinaWANFei，PENGDe1iang，YANGYu—wen，HEYue—qiu。(TheStateKeyLaboratoryforBiologyofDiseaseandInsectPests，InstituteofPlantProtection，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China；KeyLaboratoryofAgriculturalBiodiversityandPestsControl，MinistryofEducation

5、，YunnanAgriculturalUniversity，Kunming650201，China)Abstract：TheamplificationofrDNA—ITSregionwiththeuniversalprimersrDNA1，rDNA2(rDNA1／DNA2)fromtwenty—onestemnematodepopulations(Ditylenchusdestructor)onsweetpotatofromChinaandonepopulationongarlicfromKoreayieldedtwodiferentf

6、ragments(940bpand1100bp)，aftercloning，sequenceanalyzingandaligment，Itwasfoundthattherearetwodistinguishdifferentsequencesofamplifica—tionproductsofrDNA—ITSandclearlyclarifiedITSproductsintotwodifferenttypes，namedTypeA(940bp)andTypeB(1100bp)respectively．rDNA—ITSsequenceso

7、feighteenpopulationsofsweetpotatostemnema—tode(DdTH，DdCL，DdJN，DdMY1，DdYX1，DdZZ，DdLN，DdDX1，DdFN，DdYX2，DDSX1，DdDX2，DdXY，DdLL，DdSX2，DdLY，DdMY2，DdPY)belongtoTypeA，theITSsequenceis940bp，whereastheotherthrepopulationsofDdSH，DdTS，DdYSbelongtoTypeB，theITSsequenceis1130bp．Sequenc

8、ealignmentsoftheITSregionofthetwenty—onepopulationsofD．destructorshowedthereisdistinguishvaria—tionbetw