蜂胶抗衰老机制探讨2

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1、河北医科大学硕士学位论文蜂胶抗衰老机制探讨姓名：王伟申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：刘福英;宋淑霞20040301中文摘要蜂胶抗衰老机制探讨摘要目的：随着年龄的增长，老年机体患感染性疾病、

2、；{二『身免疫痫、肿瘤等疾病的机率明显增加。因此降低老年机体忠病的机率，增强抵抗力，研究延缓衰老的方法对于积极地预防疾病、延长寿命、提高生存质量具有重要的意义。本实验分别用高龄小鼠和损伤的血管内皮细胞作为实验模型。高龄模型小鼠用蜂胶灌胃、体外培养的损伤的血管内皮细胞加入适量蜂胶，以小鼠的NK细胞杀伤

3、活性、M中细胞吞噬功能、脾脏淋巴细胞增殖活性、ILl和ILl2的活性、脑组织中丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性作为体内实验检测指标；以损伤的血管内皮细胞的细胞存活数和DNA的合成、以及LPS致血管内皮细胞表达的细胞间黏附分子一1(ICAM-I)作为体外实验的检测指标，目的在于观察蜂胶对老年机体免疫功能的影响和对损伤细胞的保护作用，并对其作用机理进行研究和探讨，为蜂胶产品的临床应用及其抗衰老的保健作用提供实验依据。方法：实验分为体内实验和体外实验两部分。体内实验：将高龄(20月龄)BAL

4、B／c小鼠随机分为4组，每组10只：高龄对照组(蒸馏水灌胃0．3ml／只)；低剂量实验组(蜂胶灌胃20mg／Kg体重)；中剂量实验组(蜂胶灌胃33mg／Kg体重)；高剂量实验组(蜂胶灌胃80mg／Kg体重)；7月龄BALB／c小鼠作为低龄对照组(蒸馏水灌胃中文摘要0．3ml／只)，每天一一次，连续4周后，用乳酸脱氢酶法分别测小鼠脾脏NK细胞活性、腹腔M中细胞吞噬活性，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定脾脏淋巴细胞转化率及蜂胶对经过过氧化氢(H，O，)损伤后的脾细胞的淋巴细胞增殖活性。小鼠胸腺细胞增殖法测腹腔M中

5、细胞IL一1和脾脏淋巴细胞IL—2的活性，比色法测小鼠脑组织中MDA含量和SOD活性。体外实验：将血管内皮细胞(VEC)接种于96孔的细胞培养板，接种密度为1×104个／4L，每孔设3个复孔。分以卜二部分进行实验。第一部分：蜂胶对H10，损伤的血管内皮细胞(VEC)的保护作用：实验分4组，每组8例：对照组(10％NCS的DMEM细胞培养液培养)；各浓度蜂胶组(蜂胶浓度分别为4×10一mg／ml、4×10～mg／ml、4×10。2mg／ml培养24小时)：H，O，组(H，O，浓度为100tamol／L)：蜂胶

6、保护组(蜂胶浓度为4×10‘4mg／ml、4×10。=’mg／ml、4×10。’mg／ml培养24小时后用100umol／L的H，O，刺激4小时)。MTT比色法检测细胞存活数量，BUdR渗入法检测细胞DNA合成。第二部分：蜂胶对LPS致VEC表达ICAM．1的影响实验分4组，每组8例：对照组(10％NCS的DMEM细胞培养液培养24d,H,t)；蜂胶组(蜂胶浓度为4×10‘3mg／ml培养24小时)：各浓度LPS组(LPS浓度分别为1lag／ml、2ug／ml、3ug／ml、4ug／ml牙口5ug／ml的束

7、0激12／j、时)；蜂胶+各浓度LPS组(加入浓度为4×10。mg／ml蜂胶培养24／j、时后，分另0以1ug／ml、2ug／rot、3Hg／ml、4ug／ml和5ug／ml的LPS刺激12小时)。免疫组化法检测细胞问中支摘要黏附分子．1(ICAM一1)的表达。结果：1．NK细胞杀靶试验比较用乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定NK细胞活性。低龄对照组为52．03％±3．16％，高龄对照组为35．82％±11．23％，明显低于低龄对照组(p<0．01)。低剂量组为43．84％±6．28％，中剂量组为50，74％±

8、2．01％，高剂量组为48．46％±0．19％。经统计学分析三个剂量组NK细胞活性均高于高龄对照组，其中，中剂量组NK细胞活性明显高于高龄对照组(p<0．01)，低、高剂量组与高龄对照组相比无明显统计学差异(p>0．05)。2，淋巴细胞增殖试验用MTT法检测淋巴细胞增殖活性。用刺激指数(S1)表示。低龄对照组为2．176±0．499，高龄对照组为1．287±0。186，高龄对照组淋巴细胞增殖活性明显低于低龄对照纽(p<0．01)。低剂量组为2．193±0．157，中剂量组为1．72--4-_O．211，高剂

9、量组为2,207±0,416。三个剂量组SI均明显高于高龄对照组(p<0。01)。3．蜂胶对牌脏淋巴细胞的氧化损伤的保护作用尉M耵、法检测H，O，对脾脏淋巴细胞的氧化损伤后淋巴细胞增殖活性，怒SI(刺激指数)表示。低龄、高龄对照组分剐为2．176±0．499、1．287±O．186，高龄对照组淋巴细胞增殖活性明显低于低龄对照纽(p