绵羊溶血性曼氏杆菌灭活疫苗的制备

《绵羊溶血性曼氏杆菌灭活疫苗的制备》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据第29卷总第70期2008年6月西北民族大学学报(自然科学版)JournalofNonhwestUniversityforNationalities(NaturalScience)Vd．29．No．2June，2008绵羊溶血性曼氏杆菌灭活疫苗的制备刘翊中，毛东风，蔡勇，陈士恩(西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州730030)[摘要】用实验室分离获得的溶血性王氏杆菌菌株制备甲醛灭活疫苗，进行不同佐剂(AI(0H)3、蜂胶)菌苗的安全性及免疫保护试验研究．结果表明：所制备疫苗的各项指标均符

2、合要求。安全可靠．【关键词】绵羊；溶血性王氏杆菌；灭活疫苗【中图分类号】Q93—337【文献标识码】A【文章编号】1009—2102【2008)02—0023—04近几年来，随着我国集约化养殖业的迅速发展，畜牧业已成为农村经济的支柱产业，在国民经济中发挥着越来越重要的作用．与此同时，为保障畜牧业的健康发展，对畜禽传染病的防治也提出了更高要求。有效地控制传染病的发生，减少传染病对畜牧业生产的危害，为人民生活提供更多、更安全的畜产品是传染病防治的重要任务．目前，由于饲料中大量添加剂如糖皮质激素及其他免疫抑

3、制剂的大量使用，抗菌药物的滥用对动物正常菌群的削弱和耐药性的产生以及集约化管理对动物体免疫功能的削弱，使得药物治疗的效果越来越差，可供选择药物的空间也越来越小，这就给药物防治带来很大的困难．因此研制有效的疫苗来预防传染病越来越受到重视并被广泛的采用．2006年。康乐县某养殖场的部分小尾寒羊发生了厌食、腹泻、咳嗽、高烧、流产等症状的传染性疾病．临床病例表现为病羊初期精神沉郁，采食速度减慢，或虽有食欲但采食量减少，被毛粗乱无光泽，畏冷、数天后，病羊大部分体温升至40．5—42℃，病羊呆立，先便秘而后下痢，

4、且呈持续性腹泻，粪便恶臭，粪便有黏液．病羊表现呼吸急促，脉搏加快多在Ii0次／rain以上；随着病情的发展，鼻黏膜和眼结膜发炎，可视粘膜苍白，全身症状也比较明显，表现为呼吸浅表、频数．濒死病羊卧地不起，四肢厥冷，体温下降，呼吸极度困难。拱背缩腰。头颈伸直，张口流口水，最后因窒息或继发多种疾病而死亡．为做好疾病预防工作，我们采取死亡羊只的脾脏、肝脏、胎盘等病料进行实验室诊断，确诊为溶血性曼氏杆菌引起的绵羊曼氏杆菌病．用实验室分离获得的菌株制备了灭活疫苗，对疫苗的安全性及保护效果进行了初步研究，以求为危害

5、当地养羊业的曼氏杆菌病的预防提供技术支持，并为后期菌体蛋白疫苗研制及免疫效果研究提供必要的基础资料．1材料1．1菌种绵羊溶血性曼氏杆菌(康乐县某羊场发病羊病料中分离获得)．1．2实验仪器温度计、分析天平(sartorius产)、超净台、恒温培养箱、普通光学显微镜、pH计、高压锅、离心机．【收稿日期】2008—03—25【作者简介】刘翊中(1965一)，男，甘肃会宁人，副教授．一23—万方数据1．3试剂Bacl2、I-12S04、0．4％苯酚生理盐水、甲醛、革兰氏染液、血琼脂平板、AICl3、NaOH、

6、乙醇、蜂胶、马丁肉汤(含5％牛血清)．1．4实验动物4月龄新西兰白兔(公40只)、小白鼠(4周龄16只)购自兰州生物制品研究所．2方法2．1曼氏杆菌的灭活2．1．1纯粹检验取分离菌种少许，接种于血琼脂平板上培养，取菌落涂片染色镜检，做细菌纯度检验．2．1．2活菌计数将分离的菌种勾取接种至马丁肉汤内培养，并且利用比浊法检测细菌浓度，细菌最终浓度已达到1010CFU／mL为宜．2．1．3灭活在细菌计数基础上。按照0．4％体积比加入甲醛液，并置于37℃下灭活24～72h．其间每12h震荡一次并做灭活检验．2

7、．2菌苗佐剂的准备2．2．1A1(OH)3佐剂的制备将无水AICl3配制成25％水溶液，加热溶化，使用时再稀释成8％．另将NaOH配成4％水溶液．将8％mcl3溶液放入陶瓷缸内并水浴维持60℃，边搅边加入4％NaOH溶液，同时用pH计测定pH值达5．6～6．0为止，继续搅拌10min．分装青霉索瓶内121℃高压30rain，室温放置，高压后的AI(OH)3胶为有乳光的乳白色粘性胶体．2．2．2蜂胶佐剂的制备取约5g蜂胶，加入95％乙醇20mL，浸泡36h后，4000rps离心弃底渣取上清液，蜂胶浸出液

8、为褐色液体．2．3灭活菌苗的制备2．3．1AI(OH)3灭活菌苗的制备将高压后的AI(OH)3胶与灭活后菌液按1：5的比例混合均匀，即成乳白色AI(OH)3胶灭活疫苗．2．3．2蜂胶灭活菌苗的制备将蜂胶浸出液与灭活的菌液按1：3比例均匀混合，混合后为黄褐色蜂胶灭活疫苗．2．4疫苗安全性检验2．4．1动物接种试验将蜂胶、灿(OH)3灭活菌苗分别按1．0mE／只、5．0mL／只，腹腔接种于20只四周龄的健康小白鼠．同时设立健康对照组注射生理盐水1．0mL／只