蜂胶乙醇提取物对小鼠心肌dna甲基化的影响

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1、万方数据蜂胶乙醇提取物对小鼠心肌DNA甲基韩银淑(厦门卫生学校，福建厦门361000)摘要：目的通过观察蜂胶乙醇提取物(EEP)对小鼠心肌DNA甲基化的影响，探讨蜂胶的抗衰老作用。方法用EEP给昆明种小鼠灌胃25天后。提取小鼠心肌DNA，分别用M8pI和HpaII消化，然后取其消化产物进行电泳，并以LambdaDNA／HindⅢ酶切片断为Marker，对照检测其酶切片断的kbp。结果EEP能够保持或提高实验组小鼠心肌DNA甲基化水平。结论蜂胶具有较强的抗衰老作用。关键词：蜂胶乙醇提取物；DNA甲基化；心肌；小鼠中图分类号：G424．31文献标识码：B文章编号：1

2、671一1246(2005)19—0093一02蜂胶是经验丰富的工蜂采集生命力极强的白杨、自桦、榕树等嫩芽和花蕾及树脂类物质，归巢后几番吐哺，与其舌腺分泌物混合而制成的胶粘物质。蜂胶乙醇提取物(EEP)中含有丰富的黄酮类化合物、脂肪酸及韶类、氨基酸、维生素和多种活性酶类，此外还有人体必需的微量元素等【”，具有抗菌、消炎、抗癌、促进免疫调节等活性功能【”。近年来一些学者通过研究指出，蜂胶在抗衰老方面也具有一定的作用。蜂胶中含有大量的有效成分，可抑制脂褐素的生成，用其有效成分研制而成的祛斑增白抗皱霜经临床应用效果显著⋯。随着分子生物学的迅猛发展，衰老机理的研究已深入

3、到分子水平。DNA甲基化作用是一种基因修饰作用，可影响基因表达⋯，从而影响细胞的分化、癌变及老化f5】。所以DNA甲基化已成为人们研究生长、发育、衰老和肿瘤的一个新兴而重要的领域。一些研究表明，DNA甲基化与细胞老化密切相关。对这个课题的深入研究，必将有助于从本质上揭示老化的机理。因而通过实验探明蜂胶对DNA甲基化水平的影响，为抗衰老中药的开发提供新线索，有重要的理论意义和实用价值。l材料与方法1．1实验动物昆明种小鼠，体重(30±2)g，雌雄各半，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。1．2荫品与试剂EEP由黑龙江中医药大学生化教研室提供，淡黄色，黄酮浓度为15

4、mg／nll(以槲皮素为标准)；GenoIIlicDNA纯化试剂盒、MspI和HpaⅡ、LaIIlbdaDNA／HindⅢM8rker均购于上海生工生物工程技术服务有限公司；琼脂糖、溴化乙锭均购于Si鲫公司。1．3主要他器高速离心机，TGL16G，上海医用分析仪器厂；超声细胞粉碎机，盯91一l型，浙江省三门精工机械厂；石英亚沸高纯水蒸馏器，BYT一120型。江苏白塔石英亚沸高纯水蒸馏器厂；紫外透射反射仪，WFH一201型；微量移液器。GⅡSON9。1．4动物分组及给芮方式小鼠在实验室喂养7天后，随机分成3组，每日定时灌胃2次，持续25天。分组情况及灌胃量：EEP

5、组，300mg黄酮／kg体重；阳性对照组，500mg维生素E／kg体重；空白对照组，同体积的蒸馏水。1．5心肌DNA的提取(1)取25—30mg小鼠心脏用液氮碾碎，将粉末收集到1．5nll离心管中，用200山TE悬浮。(2)200山样品用400山细胞裂解液混匀，置于65℃的条件下5—10分钟。中途上下混撬几次。(3)加入600“l氯仿，混匀。不能太剧烈，以保证DNA的完整性。(4)用台式离心机lO000r／Inin，离心2分钟，此时应分成3层，基因DNA在上层中，如未能分离，表明样品和氯仿未混匀。取500山上层清液，置于无菌1．5nll离心管中。(5)加入500

6、mP豫cipitationSolution后混匀，室温放置2分钟。10000r／nlin离心2分钟。(6)吸掉溶液，注意不要抽提沉淀。立即加入100m1．2MNaCl。轻轻振荡直至DNA样品完全溶解。(7)加入300斗l冷乙醇，一20‘C条件下放置10分钟。lO00吖IIlin，离心3～4分钟。吸走或倒掉乙醇，用70％乙醇洗1次。倒置、室温条件下干燥10分钟。DNA用100斗l水或1．E溶解。儿科头皮静脉穿刺是实习的重点和难点，在操作前向护3．3掌握厶何做好家长的健度赦1r生讲明头皮静脉穿刺前首先要调整好心理状态，良好的心理随着人民文化层次的不断提高，自我保健意

7、识的逐渐增素质是静脉穿刺成功的关键，然后再讲清常用头皮静脉的走强，健康教育已经纳入护理的工作范畴，这就追使她们在临床行。如何选择、操作要点、固定方法及如何护理好输液患儿，避实践的同时还需要加强专业理论知识及边缘学科的学习，利用免静脉穿刺成功但因护理不当造成故障而重复穿刺，增加患沟通技巧向家长做好健康教育。只有理论和实践密切结合，才儿痛苦。冰冻三尺非一日之寒，提高头皮静脉穿刺水平，不能心能更好地为群众服务。A急，它需要一定时间去操作训练、摸索及提高悟性的过程。一93—万方数据1．6心肌DNA样品检测取DNA样品5斗l与上样缓冲液混合，O．7％琼脂糖凝胶，1×113

8、E缓冲液中电泳，紫外透射