猪链球菌病原分离株生物学特性和dna指纹分析研究

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1、山东农业大学硕士学位论文猪链球菌病原分离株生物学特性和DNA指纹分析研究姓名：耿艳红申请学位级别：硕士专业：兽医指导教师：刁有祥;沈志强20051217Y903710关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内

2、容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：酝主查垒导师签名：日期：垒堕：堕!l=山东农业大学硕士专业学位论文Randomlyamplifiedpolymorph／eDNAdayhourminutemiUititermicrolitregrammilligramsodiumdodecylsulphatecetyltriethylammoniumbromiderotation／minute随机扩增多态性DNA分析天小时分钟毫升微升克毫克十二烷基硫酸钠十六烷基三乙基溴化铵转7分

3、铸加n^)墟．眦眦o。咖吐皿。鸣啷m咖山东农业大学硕士专业学位论文中文摘要链球菌病是由链球菌感染畜禽所引起的一些疾病的总称。荷兰Jansen等(1951)和英格兰Field等(1954)报道了仔猪链球菌病。E1liott(1966)和w缸dsor等(1975)从青年猪败血症、脑膜炎和关节炎病料中分离到了链球菌。此后，在欧洲各国、澳大利亚、巴西及远东地区均有报道该病的发生。在国内最早由吴硕显(1949)于上海郊区发现本病的散发病例，二十世纪70年代发病增加，80年代后期发病更趋严重，在许多地方呈大群爆发流行，2005年6月四川省出现猪链球菌感染人致死的病例。

4、迄今已有13个省市(区)报道了链球菌病，并在华南、西南和华东地区造成大面积流行，损失惨重。猪链球菌病是多年来一直困扰我国养猪业并威胁养猪相关行业从业人员健康的主要传染病之一。本研究是对国内部分省市临床病例中分离到的20株链球菌进行生物学特性研究，在分离鉴定的基础上应用随机扩增多态性DNA(RAPD)的方法对分离株进行基因分型，计算菌株间的遗传距离，目的是便于挑选有代表性菌株作为疫苗株制作多价灭活蜂胶疫苗用于猪链球菌病的免疫防制。现总结如下：1．在2003．2004年对国内部分省市临床分离的20株链球菌进行了鉴定和分群，初步证实了国内部分省市猪链球菌流行株以

5、C群、D群为主，还有G群存在。2．采用RAPD方法对分离菌株进行分析，确立了RAPD最佳反应体系，在采用的100条随机引物中有23条能产生较好的多态性条带。3．用RAPD分型所得到的结果，20株菌株种不同菌株之间的遗传距离在O．041—O．727之间，平均值为0．293。9号菌株和12菌株号之间遗传距离最大，根据遗传距离可将20株猪链球菌分为4个聚类群。4．RAPD分型结果表明，不同血清群的菌株具有不同的指纹图，同一血清群的菌株指纹图之间也存在差异，由此可见RAPD分型方法和传统的分型方法相比，更能反映病原菌株间的亲缘关系，能够从分子学水平上揭示不同菌株间

6、的遗传距离，依此为依据，挑选出的菌株用来制作多价灭活疫苗更具有代表性，能获得更为确实的免疫效力。关键词：猪链球菌；生物学特性；DNA指纹分析山东农业大学硕士专业学位论文英文摘要AbstractStudiesonStreptococcussuispathogenyisolatesbiologycharacteristicsandDNAf'mgerprintinganalysisStreptococcussuisinfectionshaverisengraduallytobecomeOIICofthemajordiseaseproblemsintheporki

7、ndustry．Hollander,Jansen(1951)andEngland,Field(1954)reportedstreptococcussuisinfusions．Elliott(1966)andWindsor(1975)isolatedSII'eptOCOCCUSsuistiomporkersapracmh,meningitisandarthritis．Later,thisdiseasewasreportedinEurope，Australia,BrailandFarEast．InChina,WushuoxianfirstfoundtheSpo

8、mdicCaSCofstreptococcussuisinf醐io