ⅰ型胶原蛋白基因在胃癌、食管癌中的表达

《ⅰ型胶原蛋白基因在胃癌、食管癌中的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、维普资讯http://www.cqvip.comI型胶原蛋白基因在胃癌、食管癌中的表达ExpressionofCollagenGeneTypeIinGastricCancerandEsophagealCancerLIUYong-pan，ZHANGYou-li，GA0Guang,eto1．刘勇攀。张尤历，高广，张宇川，陆芬英，吴莺f1．江苏大学附属医院，江苏镇江212001；2．江苏大学生命科学研究院，江苏镇江212001)摘要：『目的]应用荧光差异显示技术筛选胃癌中特异表达的基因，并验证其在胃癌、食管癌中的表达，为进一步了解

2、胃癌、食管癌发生、发展的分子机制提供帮助。[方法]应用荧光差异显示技术(DD—PCR)分析胃癌及其相对应的正常胃黏膜组织，获得差异表达的基因片段，这些片段经过二次PCR再扩增后进行克隆和测序，通过在GenBank中同源性检索，查找与差异片段相对应的同源基因。应用半定量PCR，荧光定量PCR等方法进一步验证该基因在胃癌及食管癌中的表达差异。『结果]通过DD—PCR得到的差异片段中的一个片段对应于人I型胶原蛋白基因。该基因的读码框长4395bp，编码1464个氨基酸，编码蛋白分子量约139．01kD。该基因在胃癌及食管癌组织中的

3、表达量高于其对应的癌旁组织，并且在食管癌组织中的表达差异较胃癌中更明显。[结论]人I型胶原蛋白基因在胃癌及食管癌中均呈高表达，推测其可能在胃癌及食管癌的发生发展中起作用。主题词：基因，I型胶原蛋白；胃肿瘤；食管肿瘤；荧光差异显示；聚合酶链反应中图分类号：R735．1：R735．2文献标识码：A文章编号：1671—170X(2008)06—0435—03分子生物学研究表明癌基因、抑癌基因和细胞于一7OcI=冰箱中保存。周期控制基因的异常表达参与了胃癌及其他恶性肿1．2试剂和仪器瘤的演进lll。目前许多胃癌特异表达基因已被鉴定及

4、RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司，荧光研究，如p53基因、谷胱甘肽S2转移酶基因等，但胃差异显示试剂盒购于Genhunter公司．SuperScriptII癌发生、发展的确切机制仍未阐明，因此寻找胃癌中反转录试剂盒购于Gibco公司．荧光定量PCR试剂新的特异表达的基因对胃癌的基础研究与临床研究盒购于TaKaRa公司。主要仪器有FMBIO@II有重要意义。本试验应用荧光差异显示方法(DD—(HITACHI)荧光差异显示系统，STRATAGENEPCR)筛选到胃癌中差异表达的I型胶原蛋白基因．MX3000

5、P荧光定量PCR仪．Genspecm(HITACHI)并利用mRNA定量分析方法检测该基因在胃癌及1．3cDNA的制备食管癌组织中与其对应癌旁组织之间表达的差异用Trizol提取的方法提取胃癌、食管癌组织及其癌旁组织的RNA，使用Gens—pecm测定总RNAl材料与方法的浓度，经DNase消化后，反转录得到胃癌、食管癌及其癌旁组织的cDNA1．1临床材料1．4DD—PCR实验中标本来自2006年3月至2006年6月间3种荧光引物(FHT12A，FHT12G，FHT2C)与21种于江苏大学附属医院接受手术治疗的胃癌患者12试

6、剂盒中的随机引物做不同组合，进行荧光差异显例及食管癌患者14例。每例患者均取手术切除的癌示PCR(DD—PCR)，PCR产物8l上样于6％的聚丙组织及癌旁组织(距离癌组织约2～3cm)。并经病理烯酰胺凝胶，1400V恒压电泳5h左右检查证实。组织离体后立即在液氮中速冻．并置1．5差异片段的克隆基金项目：江苏省镇江市社会发展计划项目(SH2007019)差异条带经切割和处理后作为模板，进行二次通讯作者：张尤历收稿日期：2008—02—19；修回日期：2008—03—10PCR，将产物连接于T载体。连接产物转化大肠杆菌：；；《；

7、{々；}§{胖蹲渤8年第t6期435⋯；；：{{《《}{维普资讯http://www.cqvip.comJournalofOncology，2008，v01．14，N0．6DH5ct，蓝白斑筛选阳性克隆。阳性克隆经酶切鉴定2．3荧光定量PCR分析后测序(上海生工)。应用12例胃癌、14例食管癌标本对人I型胶1．6荧光定量PCR分析原蛋白基因在胃癌、食管癌及癌旁组织的表达量进利用Primer5．0软件设计用于定量PCR的胶原一步检测。应用SPSS13．0软件作定量分析，结果表蛋白I型基因引物，内参选用人3-actin，检测胶原

8、明，人I型胶原蛋白基因在胃癌及食管癌组织中的蛋白I型基因在胃癌、食管癌组织及其癌旁组织中表达量高于其相应的癌旁组织，差异具统计学意义表达的差异。引物序列为：胶原蛋白I型基因：5．(P