茯苓菌液体培养条件的优化及其多糖的提取

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1、第!"卷第#期工业微生物51.6!"716##$$"年"月%&’()*+,-./,0+12,1.1348(&6#$$"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!茯苓菌液体培养条件的优化及其多糖的提取薛正莲，欧阳明，王岚岚（安徽工程科技学院生化工程系，安徽芜湖#<;$$$）摘要研究了茯苓菌株H#6;$的液体培养条件，并对其中的多糖进行了提取和分析。结果表明，最佳培养条件为初始IJG6G、摇床转速;G$+#A,&、培养温度#"K、

2、装液量F$AL##G$AL三角瓶、培养时间G’；最适碳、氮源分别为G3碱溶性多糖。%N分析结果表明这两种多糖的主要成分为$@O@葡聚糖。关键词：茯苓；液体培养；优化；生物量；多糖茯苓属担子菌亚门，多孔菌科，卧孔菌属，是珍（#）液体培养基（M）：葡萄糖!3，蛋白胨;3，贵的药食两用菌，具有益脾、促胃、祛湿、安神、生津SJ#TU<$6;3，/3QU<$6$G3，V

3、-V.#FA3，/&QU<"［;］等功能。近年来研究显示茯苓中的多糖或异多糖A3，5P;$6$!A3，柠檬酸铁铵$6GA3，蒸汽灭菌#$具有促进细胞分裂、抗诱变、抗肿瘤、增强免疫等活A,&（5P;另行灭菌）。［#］性而倍受关注，其开发价值及应用前景巨大。目!"#实验方法前茯苓菌为野生或人工种植，周期长，受产地限制，!"#"!活化与培养难以获得标准一致茯苓菌以满足工业化。而液体发!"#"!"!斜面培养酵具有易于操作、易于工业生产、易于提高产率的优活化培养基接种两环原菌种于#"K培养一周点，已逐渐成为真菌生物活性

4、物质开发的方向，国内后，放冰箱内保存待用。［!、<］的研究尚处于刚起步阶段。本文对激光诱变所!"#"!"#摇瓶发酵获得的速生高产突变株H#6;$的培养条件及培养接种$6G0A#方块!块茯苓菌丝于一定体积的基中碳、氮源的种类和浓度进行了优化，探求批量获液体培养基中（#G$AL三角烧瓶），在一定温度和一得茯苓菌的方法，并对其中的多糖进行了提取和分定转速下摇瓶培养。析。!"#"#培养条件的优化!材料与方法摇瓶转速对茯苓菌生物量的影响：将盛有;$$AL液体培养基的#G$AL三角瓶分别置于不同转!"!材料速下#"K进行

5、摇瓶培养G’。!"!"!菌株摇瓶装液量、起始IJ值、培养温度、培养时间茯苓H#6;$（!"#$%&"&"’@H#6;$）为本实验室经对茯苓菌生物量的影响：采用L（<<）正交试验进行激光诱变所获得的速生高产突变株。;"!"!"#主要仪器优化。PQ@%?R振荡培养箱。!"#"$碳、氮源的优化!"!"$培养基配制摇瓶培养基时，加入不同碳源及氮源，观察（;）活化培养基：土豆#$M，蛋白胨#M，葡萄茯苓菌生长情况，选取最佳碳、氮源，并进行碳、氮源糖#M，琼脂#M，IJ自然。浓度优化。安徽省教育厅青年基金项目（#$$#9

6、:;;<）作者简介：薛正莲（;=">!），女，副教授，主要从事发酵工程方面的研究。?@A-,.：B(CDEC&$FG;"),&-601A—<<—第@期薛正莲，等：茯苓菌液体培养条件的优化及其多糖的提取第#-卷!"#"$生物量的测定#"#摇瓶装液量、起始()、培养温度、培养时间对培养液用!"目铜筛过滤，收集菌丝体用蒸馏水茯苓菌生物量的影响洗涤#次，$"""%!&’(离心)"&’(，得菌丝体于$*+采用2（$$）正交设计考察这些因素对茯苓菌)-真空干燥得菌丝干重。生物量的影响，实验安排及结果如表)。!"#"%茯苓

7、多糖的提取表)正交实验结果与极差分析菌丝体的预处理：#",菌丝体分别用乙酸乙试验号76时间（D）摇瓶装量（&2）温度（+）菌丝干重（,!)""&2）酯、丙酮进行索氏提取-.，去脂肪，凉干备用。))（*/"）)（$）)（-"）)（@$）"/E*)水提法：处理后的茯苓粉末加*倍量的水，沸水@)@（*）@（!"）@（@-）)/#!E#)#（-）#（)""）#（@!）"/EF!提取)/*.，离心得上清液。沉淀继续水提一次，离$)$（F）$（)@"）$（#"）"/F#@心，合并两次上清液减压浓缩至)!*，加入#倍无水*

8、@（*/*）)@$"/EE#-@@)#)/$!)乙醇，于$+冰箱内静置过夜，沉淀物于半透膜透析F@#$@)/@#$过夜，真空干燥得水溶性粗多糖。!@$#))/#**E#（-/"）)#@)/)*#碱提法：上述滤渣用*倍量"/*&01!2的3456)"#@$)"/!E*浸提过夜，离心得上清液，沉淀继续用"/*&01!2))##)$)/)@*)@#$@#)/@))3456浸提过夜，合并两次上清液，用乙酸调