gfp标记内生枯草芽孢杆菌y10及其在白菜体内的定殖

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1、生态学杂志ChineseJournalofEcology2015，34(7):2064－2070GFP标记内生枯草芽孢杆菌Y10及其在白菜体内的定殖112，3112，3＊＊杜芳何鹏飞吴毅歆陈卓君杨静何月秋123(云南农业大学植物保护学院，昆明650201;微生物菌种筛选与应用国家地方联合工程研究中心，昆明650207;云南农业大学农学与生物技术学院，昆明650201)摘要枯草芽孢杆菌Y10是具有防治根肿病的白菜内生菌株。为研究其在白菜体内的定殖规律，将不同来源的含绿色荧光蛋白(GFP)质粒导入Y10进行

2、荧光标记，测定了荧光标记菌的质粒稳定性、生长曲线及室内平板拮抗活性。结果表明，仅有pHT01-P43GFPmut3a能在Y10中稳定地遗传，且对Y10的生长和病原真菌拮抗活性无不利影响。盆栽防效试验结果显示，在不同的栽培基质中，Y10的标记菌株与野生型对白菜根肿病防效无显著差异。稀释涂板回收及共聚焦激光扫描显微观察都证实，接种9d后在白菜的根、34－1茎及叶部组织均有标记菌株的定殖，且在44d内仍保持10～10cfu·g组织。这些定殖结果表明，Y10在白菜体内具有良好的定殖能力，且这种特性可能与其防治根

3、肿病有关。关键词内生枯草芽孢杆菌;绿色荧光蛋白;防治效果;质粒;遗传转化中图分类号S476．1文献标识码A文章编号1000－4890(2015)7－2064－071ColonizationofGFP-taggedendophyticBacillussubtilisY10inChinesecabbage．DUFang，12，3112，3＊＊1HEPeng-fei，WUYi-xi，CHENZhuo-jun，YANGJing，HEYue-qiu(FacultyofPlant2Protection，Yunnan

4、AgriculturalUniversity，Kunming650201，China;NationalandLocalJointEngineeringResearchCenterforScreeningandApplicationofMicrobialStrains，Kunming650207，3China;FacultyofAgronomyandBiotechnology，YunnanAgriculturalUniversity，Kunming650201，China)．ChineseJournalo

5、fEcology，2015，34(7):2064－2070．Abstract:EndophyticBacillussubtilisY10isolatedfromChinesecabbage(Brassicarapa)cancontroleffectivelycruciferousvegetableclubrootdisease．Tounderstanditsclubroot-controlmechanisms，GFPplasmidsweretransformedintoY10cellsforfluore

6、scence-taggingbynaturaltransformation．Theplasmidstability，growthcurveandplateantagonismbio-assayofGFP-taggedstrainsweredetermined，andtheresultsshowedonlyplasmidpHT01-P43GFPmut3acouldbemaintainedstablyanditsintroductionhadnosignificantnegativeinfluenceonY

7、10growthandantagonisticperformance．Potbio-assayexperimentwithdifferentcultivationmatrixesindicatedthattherewasnosignificantdifferenceinclubroot-controlefficiencybetweenY10-P43GFPmut3aanditswildtype．Recoveryandobservationbyconfocallaserscanningmicroscopec

8、onfirmedthat，9daysafterinoculation，taggedstraincouldcolonizetheroot，stemandleafofChinese34－1cabbage，andthecolonizationdensitystillkeptat10－10cfu·gtissuesin44daysafterinoc-ulation．Alltheresultssuggestthattheclubroot-control