钩端螺旋体对各种宿主细胞及ecm分子的黏附和作用

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1、浙江大学医学院硕士学位论文钩端螺旋体对各种宿主细胞及ECM分子的黏附和作用姓名：张皓申请学位级别：硕士专业：病原生物学指导教师：严杰20100101浙江大学硕士学位论文中文摘要钩端螺旋体对各种宿主细胞及ECM分子的黏附和作用浙江大学医学院：硕士研究生：导师：病原生物学张皓严杰教授中文摘要目的：了解问号钩端螺旋体(简称钩体)对宿主细胞及细胞外基质(ECM)分子的黏附作用及其差异。了解多种宿主细胞ECM分子的种类及其分布差异。方法：建立问号钩体黄疸出血群赖型56601株对J774A．1、L929和Vero细

2、胞感染模型，采用Fontana镀银染色法及显微镜检查法，了解问号钩体56601株黏附细胞ECM的效果。建立ELISAs，检测问号钩体56601株黏附ECM分子层粘连蛋白(LN)、纤维纤连蛋白(FN)、核心蛋白多糖(DEN)及胶原蛋白1、2、4(COLl，2，4)的作用，采用竞争性抑制试验对上述实验结果进行验证。采用免疫荧光染色法和激光共聚焦显微镜观察ECM分子FN、LN、DEN、COLl—4在THP．1，J774A．1、HEK293、NRK、COS．7、NRK-49F、L-02、IAR．20和HUVEC

3、细胞中的分布。建立各种ELISAs定性验证以上结果并定量检测以上ECM分子在各细胞株的含量结果问号钩体56601株能以一端或两端黏附于L929、J774A．1和Vero细胞的ECM部位。问号钩体56601株可与上述6种ECM分子发生黏附，其中对COLl、LN、COlA的黏附作用较强。问号钩体56601株分别与上述6种ECM分子预孵育后，对相应ECM分子的黏附作用明显下降。各细胞ECM分子种类和含量存在明显差异。人单核．巨噬细胞THP．1和小鼠单核．巨噬样细胞J774A．1仅含有FN。人肾上皮细胞HEK2

4、93含有FN和COlA，大鼠肾上皮细胞NRK含有FN、LN，其中FN含量较高．猴肾成纤维细胞COS．7含有LN，COL3和COlA，其中LNⅡ浙江大学硕士学位论文中文摘要和COlA含量较高。大鼠肾成纤维细胞NRK-49F含有FN、LN、DEN、COL3和COlA，其中FN、DEN和COlA含量较高。人肝上皮细胞L-02含有FN、LN、COL3和COIA，其中FN和COlA含量较高，而小鼠肝上皮细胞IAR．20仅含有COIA。人静脉内皮细胞HUVEC含有FN、LN、COL3和COL4．结论ECM是问号钩体

5、黏附宿主细胞的主要部位。LN、FN、DEN、COLl、COL2、COL4均是问号钩体黏附的受体分子，但问号钩体对不同ECM分子的黏附效果有一定差异。不同的ECM分子分布在不同的问号钩体宿主细胞中，且含量存在明显差异。【关键词】问号钩端螺旋体；黏附宿主细胞；感染模型；细胞外基质分子；分布III浙江大学硕士学位论文英文摘要EffectanddiversityofLeptospirainterronganadheringhostcellsandmajorextracellularmatrixmolecules

6、DepartmentofMedicalMicrobiologyandParasitology,CollegeofMedicalScience，ZhejiangUniversityGraduateSupervisorZhanghaoYanJieAbstractobjective：TodeterminetheabilityanddiversityofLeptospirainterrongansadheringtoextracellularmatrix(ECM)ofhostcells，andtodetermi

7、nethedistributionandcontentofdiferentextracellularmatrix(ECM)moleculesinvarioushostcellsofLeptospiram纪rrongan．MethodsModelsofL．interrongansserogrouplcterohaemorrhagiaeserovailaistrain56601infectingJ774A．1，L929andVerocellswereestablished，andFontanasilveri

8、mpregnationmethodplusmicroscopywereappliedtodemonstratetheeffectofL．interrongansstrain56601adhereextracellularmatrix(ECM)ofthecells．ELISAswereestablishedtodetecttheeffectsofL．interrongansstrain56601adheretoECMmoleculeslami