雌、雄激素对去卵巢雌鼠泪液分泌及泪腺中bax，bcl2表达的影响和泪腺中tgfβ1、mmp2及其抑制剂timp2表达的实验研究

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1、河北医科大学博士学位论文雌、雄激素对去卵巢雌鼠泪液分泌及泪腺中Bax，bcl-2表达的影响和泪腺中TGF-β<,1>、MMP-2及其抑制剂TIMP-2表达的实验研究姓名：赵萍申请学位级别：博士专业：中西医结合临床指导教师：宋秀君20090401中文摘要雌、雄激素对去卵巢雌鼠泪液分泌及泪腺中Bax，bci一2表达的影响和泪腺中TGF．pl、MMP．2及其抑制剂TIMP．2表达的实验研究摘要眼表(角膜、结膜、副泪腺和睑板腺)、主泪腺和它们之间的神经放射环由于其密切的解剖和功能联系构成一个整体功能单位，称为“眼表泪腺反馈系

2、统”。它们共同发挥对泪液分泌和泪膜形成的调控作用，维护眼表健康，任一环节的损害均可导致泪膜完整性和功能的破坏，从而导致干眼。干眼的发病机制比较复杂，目前认为主要与炎症、细胞凋亡、神经调节机制异常和性激素水平失调等因素相关。干眼常发生于老年女性，性激素被认为是其发病机制之一。在绝经后的妇女，内分泌变化是干眼发生的重要因素，然而是由于雌激素过剩还是不足、雄激素的缺乏和／或雌、雄激素之间的不平衡影响眼表功能尚有争议，哪些因素起主要作用仍不清楚。细胞凋-亡(apoptosis)是一种特殊的细胞死亡类型，指细胞在一定的生理或者

3、病理条件下，遵循自身固有程序结束生命的现象。细胞凋亡是一种正常的生理现象，通过凋亡，机体清除感染和损伤，维持机体正常生理功能。然而，在一定条件下，细胞凋亡又是一种病理现象。细胞凋亡受多种信号的协同调控，其中最重要的调节细胞凋亡的因子是bcl．2和它相关的基因。细胞凋亡在免疫性疾病中起到十分重要的作用。干眼泪腺和眼表上皮细胞的凋亡异常增加，而局部组织中的淋巴细胞的凋亡却被抑制。基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，1VIMPs)的表达受细胞因子、生长因子、性激素、神经激素、细胞形态改变，细胞

4、间交互作用和细胞转化等多种因素的调节。已证实性激素在许多组织中调节MMP一2和MMP一9的合成，全身性和非全身性干燥综合症(SjSgrensyndrome，SS)病人泪液和唾液中MMP．2和MMP．9均增加，在不同的SS鼠模型中也是如此，泪腺炎症诱导的兔干眼模型泪腺和角膜中MMP．2和MMP一9也同样升高，认为MMPs可能是本病的发病机理。转化生长因子一Pl(transforminggrowthfactor—pl，TGF—p1)是一类具有多种生物活性的细胞因子，参与调节细胞生长、分化等多种功能，是免疫系统的主要抑制中

5、文摘要性分子。TGF．p1刺激细胞外基质(ECM)女17胶原蛋白、纤维连接蛋白、层粘蛋白和蛋白多糖的合成，抑制基质蛋白酶的产生，促进调节各种细胞连接蛋白受体的表达及ECM成分与这些受体的结合。然而关于性激素调节泪腺中MMP．2及其抑制剂TIMP．2表达，以及与TGF．131的相互关系却不清楚。以往研究表明：1715．雌二醇促进人角膜上皮细胞中促炎细胞因子和MM-Ps的表达，而M-MPs与干眼症又有非常密切的关系。近些年，性激素在干眼中的作用逐渐引起人们的重视，成为研究的热点。为此本实验设计了通过对雌性性成熟Wista

6、r大鼠行双侧卵巢切除术(Ovariectomy，ovx)，模拟人工绝经状态，给予大鼠雌、雄激素全身及局部治疗，观察血清雌、雄激素水平、泪液分泌量、泪膜稳定性、大鼠泪腺和眼表组织学的变化，检测泪腺中凋亡基因Bax、bcl．2、TGF．13】因子表达及MMP．2及其抑制剂TIMP．2的表达，探讨雌、雄激素对去卵巢雌鼠泪液分泌及泪腺功能的影响及其作用机制，为临床医生应用雌、雄激素治疗绝经期妇女干眼提供实验依据和理论基础。本实验分为三部分。第一部分雌、雄激素对去多日巢雌鼠泪液分泌及眼表和泪腺组织病理学和超微结构改变的影响目的

7、：探讨雌、雄激素对去卵巢雌鼠泪液分泌及眼表和泪腺组织病理和超微结构改变的影响。方法：雌性性成熟Wistar大鼠64只，随机分为正常对照组8只、假手术组8只、实验组48只。假手术组仅打开腹腔，切除部分脂肪，实验组行双侧0VX。术后5个月将实验组随机分为实验1组、实验2组、实验3组、实验4组、实验5组、实验6组，每组8只大鼠。自术后第5个月起，实验1组不予任何干预，实验2组给予粟米油100ul皮下注射每3天一次，实验3组给予苯甲酸雌二醇200ug／kg皮下注射每3天一次，实验4组给予苯甲酸雌二醇点眼，每日4次，实验5组给

8、予3．75mg／kg丙酸睾丸酮肌肉注射每3天一次，实验6组给予2．5％丙酸睾丸酮点眼，每日4次。分别于术前、术后第1、2、3、4、5个月及给药后6周，测大鼠泪液分泌量(SchirmerItest，SIt)、泪膜破裂时间(tearfilmbreak．uptime，BUT)及角膜荧光素钠染色情况。给药6周后处死动物，立刻取所有大鼠泪腺、角膜和结膜，