肾癌肿瘤相关抗原g250及g250蛋白多糖（pg）区基因的克隆、表达及鉴定

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1、徐州医学院硕士学位论文肾癌肿瘤相关抗原G250及G250蛋白多糖（PG）区基因的克隆、表达及鉴定姓名：吴阳申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：张敬川;郑骏年20080401徐州医学院硕士学位论文缩略词RCC础FCSPG心DMSONBTBC口CADEPC英文全称缩略词表Abbreviationrenaleellcarcinomatumorassociatedantigenfetalcalfserum中文全称肾细胞癌肿瘤相关抗原胎牛血清protooglycau蛋白多糖alKalinephosphatase碱性磷酸酶dimethylsulfoxide二甲基亚砜nitrobluetetrazol

2、iumchloride氮兰四唑5-bromo-4．chloro一3一indolylphosphate5-嗅-4一氯-3吲哚磷酸Diethylpyrocarbonate焦磷酸二乙酯SDS．PAGESodiumdodecylsulfate-polyacrylami一十二烷基磺酸钠一聚丙烯degelelectrophoresis酰胺凝胶电泳徐州医学院硕士学位论文论文独创性声明t旨瘟I冲福搁关硫原似口臣G却亥百多糙(f，c)B本论文蔓园固垂隆：叁盘垂丝：垂一是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志

3、对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者签名：：主羔殛日期：2鲤丕奎，竖且论文使用授权声明本人完全了解徐州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：』∑缸导师签名：日期：2QQ婆』西徐州医学院硕士学位论文论文审阅认定书研究生』兰l望．在规定的学习年限内，按照研究生培养方案的要求，完成了研究生课程的学习，成绩合格；在我的指导下完成本学位论文，经审阅，论文中的观点、数据、表述和结构为我所认同，

4、论文撰写格式符合学校的相关规定，同意将本论文作为学位申请论文送专家评审。导师签名：徐州医学院硕士学位论文肾癌肿瘤相关抗原G250及G250蛋白多糖(PG)区基因的克隆、表达及鉴定中文摘要目的研究肾癌肿瘤相关抗原G250及G250蛋白多糖(PG)区基因的克隆，蛋白表达及鉴定。方法从肾癌细胞786．0中提取mRNA，采用RT—PCR方法扩增出G250及G250PG区eDNA。将获得的eDNA片段插入pET28a(+)表达载体，构建重组质粒pET-28a(+)-G250／pET-28a(+)一G250PG，转化DH5a大肠杆菌。通过PCR鉴定筛选出正确的重组子，并用其转化BL21CodonPlus

5、菌。采用IPTG诱导工程菌进行诱导表达，SDS．PAGE及Westernblot鉴定。结果克隆的基因经测序证实，G250／G250PG区序列正确。构建重组质粒pET-28a(+)·G250／pET-28“+)一G250PG，并在原核系统中表达G250／G250PG重组蛋白，目的蛋白均具有较好的抗原性和特异性。结论成功完成G250／G250PG区基因克隆及表达，为在G250／G250PG蛋白纯化基础上进行抗体制备和G250功能研究提供了实验依据。关键词肾细胞癌；G250抗原；PG区蛋白2徐州医学院硕士学位论文Studyonthecloning，expressionandidentificati

6、onoftherenalcellcarcinoma—associatedantigenG250andG250PGregionAbstractobjectiveToclone，expressandidentifythetumor-associatedantigenG250andG250proteoglycan(PG)region．MethodsThernRNAWasextractedfromhumanrenalcarcinomacellline786—0．GenefragmentsencodingG250andG250PGwasobtainedbyRT-PCR，andWasclonedinto

7、prokaryoticexpressionvectorpET28a(+)toconstructtherecombinantplasmidpET一28a(+)一G250／pET一28a(+)一G250PGTherecombinantVectorsweretransfectedintoE．coliDH5aandPCRassayWasperformedtofindouttherightrecombinantclon