碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞内核心蛋白多糖基因表达的影响

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1、万方数据·研究报告·生物技术通报BIoTECHNoLoGYBULLETIN2008年第3期碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞内核心蛋白多糖基因表达的影响程远1曾照芳1朱俊2(1重庆医科大学生物医学工程系，重庆400016；z西南交通大学土木工程学院，成都610031)摘要：利用外源性碱性成纤维细胞生长因子(BasicFibroblastGrowthFactor，bFGF)刺激体外培养的人正常牙周膜细胞。采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)检测细胞内decorin的基因表达的变化，研究bFGF对体外培养的人牙周膜细胞内核心蛋白多糖(decorin)的作用，进一步探讨bFGF抑制I型胶原

2、的作用机制。发现bFGF刺激牙周膜细胞后能促进牙周膜细胞的增殖，bFGF抑制decorin的合成是bFGF促进牙周膜细胞增殖的重要调节因素之一。关键词：牙周组织再生bFGF核心蛋白多糖EffectofBasicFibroblastGrowthFactorontheGeneExpressionofDecorinbyPeriodontalLigamentCellsinCultureChengYuanlZengZhaofan91ZhuJun2(1BepttrtmentofBiomedicalEngineering，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing40001

3、6；2SchoolofCivilEng．。SouthwestJiaotongUniversity，Chengdu610031)Abstract：ThisstudywastofindOUttheeffectsofExogenousbasicfibroblastgrowthFactor(bFGF)ondecorinofperiodontalligamentcells(PDLC)．GeneexpressionlevehwereanalyzedbyRT—PCR。toevaluatetheprincipleofbFGFoninhibitingtypeIcollagen．Theresearchshow

4、sthatbFGFenhacetheproliferationofPDLC，whichismainlycausedbybFGFinhibitingcompositionofdecorin．Keywords：PeriodontalregenerationbFGFDecorin牙周病是口腔两大类主要疾病之一。在牙周组织伤口愈合的4种来源细胞中，只有牙周膜细胞(periodontalligamentcells，PDLCs)具有牙周组织再生的能力【ll。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对牙周膜细胞具有多种生物学作用，它可以促进牙周膜细胞的增殖，促进透明质酸的合成，提高层粘连蛋白的mRNA水平，抑

5、制I型胶原纤维、碱性磷酸酶和弹性蛋白原的合成[21。1材料与方法1．1人正常牙周膜细胞的取材、培养和扩增1．1．1原代培养【31在口腔外科门诊收集正畸拔除的12～18岁青少年健康前磨牙．立即投人装有无菌D．Hanks溶液的青霉素包装瓶中，轻轻晃动瓶子大约5一lOmin，将牙根面的血迹冲洗干净，然后用无菌镊子将牙齿夹出至另一个装有无菌D—Hanks溶液的青霉素包装瓶中，冰浴下带到实验室。1．1．2传代培养当细胞达到80％～90％汇合时，吸去培养液，0．25％胰蛋白酶：0．02％EDTA(1：1)的混和消化液消化细胞2～5min，至镜下观察细胞突起回缩，细胞变圆时终止消化，吸管轻柔反复吹打形成

6、均匀的细胞悬液，不要遗留有细胞团。细胞悬液以1：2的比例接种于25cm2一次性无菌培养瓶中继续培养，以后每3d更换一次培养液。收稿日期：2007．11．16作者简介：程远：3￡(1981-)，硕士研究生，研究方向：生物医学信息学，E-mail：chengyuan2001@163．coin通讯作者：曾照芳，教授。电话：023—68485009，E-mail：zen9000@126．com万方数据生物技术通报BiotechnologyBulletin2008年第3期1．1．3细胞冻存取第3代对数生长期的细胞。冻存前1d更换一次培养液。用0．25％胰蛋白酶将单层生长的细胞消化下来，用弯头吸管轻柔

7、地将细胞吹打成细胞悬液。将细胞悬液移入50ml的无菌离心管中，800r／min离心10min。小心吸去上清液。加入1．5ml的细胞冻存液，冻存液的成分是含有10％DMSO和20％FBS的DMEM培养液。用吸管轻轻吹打形成均匀的细胞悬液，移人准备好的无菌1．5ml冻存管中，标记好细胞名称、冻存时间后放入冻存盒中，一80℃过夜，第二天移人液氮中保存。1．2人正常牙周膜细胞的鉴定1．2．1制备细胞爬片按照细胞培养玻璃器皿要求清