SNT2497.4-2010进出口危险化学品安全试验方法酿酒酵母有丝分裂重组试验.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４９７．４—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第４部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊—犘犪狉狋４：犛犪犮犮犺犪狉狅犿狔犮犲狊犮犲狉犲狏犻狊犻犪犲犿犻狋狅狋犻犮狉犲犮狅犿犫犻狀犪狋犻狅狀犪狊狊犪狔２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２４９７．４—２０１０前言ＳＮ／Ｔ２４９７《进出口危险化学品安全试验方法》系列标

2、准共分为２９部分：———第１部分：体内哺乳动物肝细胞程序外ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）试验；———第２部分：空斑形成细胞（ＰＦＣ）试验；———第３部分：大型溞繁殖试验；———第４部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；———第５部分：睾丸细胞ＵＤＳ试验；———第６部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；———第７部分：小鼠耳肿胀试验；———第８部分：腘窝淋巴结试验；———第９部分：血清溶血素测定试验；———第１０部分：Ｔ淋巴细胞增殖功能测定试验；———第１１部分：种系突变试验；———第１２部分：单细胞凝胶电泳分

3、析试验；———第１３部分：荧光原位杂交试验；———第１４部分：ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；———第１５部分：ＰＣＲＳＳＣＰ实验；———第１６部分：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第１７部分：哺乳动物行为毒理学试验；———第１８部分：ＤＮＡ加合物的检测方法；———第１９部分：ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第２０部分：Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量；———第２１部分：琼脂糖凝胶电泳试验；———第２２部分：ＤＮＡ的Ｔｍ值测定方法；———第２３部分：细胞器的分离实验方法；———第２４部分：细

4、胞免疫功能体外检测方法；———第２５部分：体液免疫功能试验；———第２６部分：巨噬细胞功能试验；———第２７部分：流式细胞术检测凋亡；———第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；———第２９部分：生化需氧量（ＢＯＤ）测定。本部分为ＳＮ／Ｔ２４９７的第４部分。本部分修改采用经济合作与发展组织（ＯＥＣＤ）化学品测试指南ＮＯ．４８１《酿酒酵母有丝分裂重组试验》，其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按ＧＢ／Ｔ１．１—２０００做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负

5、责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：熊中强、王利兵、彭梓、张园、赵琢、韩伟。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２４９７．４—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第４部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验１范围ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分规定了进出口危险化学品进行酿酒酵母有丝分裂重组试验的试验原理、试验程序和试验结果。本部分适用于判定进出口危险化学品能否引起真核微生物酵母的有丝分裂重组。２

6、术语和定义下列术语和定义适用于本部分。２．１有丝分裂交换犿犻狋狅狋犻犮犮狉狅狊狊犻狀犵狅狏犲狉基因之间ＤＮＡ片段的交换（通常在一个基因和其着丝粒之间），导致交互的产物。２．２有丝分裂基因转换犿犻狋狅狋犻犮犵犲狀犲犮狅狀狏犲狉狊犻狅狀在一个基因内序列的信息单向转移，主要导致非交互产物。３原理３．１利用酿酒酵母（犛犪犮犮犺犪狉狅犿狔犮犲狊犮犲狉犲狏犻狊犻犪犲）的某些菌株从杂合等位基因变为纯合等位基因时，菌株的一些表现性状及生长特性的改变来检测受试物是否引起了真核微生物酵母的有丝分裂重组。有丝分裂重组可以

7、在酵母基因之间及同一基因内发生，前者称为交换，后者称为转换。３．２试验中有丝分裂的交换是通过杂合菌株中产生隐性纯合子的菌落或子菌落证实的；而有丝分裂转换是通过在同样的基因上携有两个不同的缺陷型等位基因的营养缺陷型杂合子菌株中产生原养型恢复体证实的。３．３利用二倍体酿酒酵母菌株Ｄ４在选择性培养基中生长的特性检测有丝分裂基因转换。ａｄｅ２２，ａｄｅ２１；ｔｒｐ５１２和ｔｒｐ５２７是ａｄｅ２和ｔｒｐ５位点上的异点等位基因。这些等位基因进行有丝分裂基因转换，产生携带一个野生型等位基因的原生型菌落，这些

8、菌落能在缺乏色氨酸（ｔｒｐ）或腺嘌呤的选择性培养基上生长。３．４酵母菌株的有丝分裂交换可通过观察Ｄ５或Ｄ７菌株菌落的颜色变化（产生红色或粉色的纯合子有丝分裂交换）或观察Ｄ菌株产生放线菌酮抗性（ｃｙｈｒ７２）在含放线菌酮的培养基上生长来检测。４试验程序４．１试验方法４．１．１最常用的菌株为二倍体Ｄ５、Ｄ７、Ｄ４和ＪＤ１菌株，所用的传代的培养菌株的自发有丝分裂重组频率应在可接受的正常范围内。４．１．２在试验的不同阶段选用适当的培养基（ＹＥＰＤ，ＳＭＭ，ＳＣＭ