目的基因验证课件

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1、目的基因验证酶切验证方向SenseAnti-sensePromoterPromoterCodingsequenceCodingsequenceNOSNOS双酶切单酶切酶切位点的选择1、载体上有，目的片段内部也有，但最好都分别只有一个位点；2、目的片段上的酶切位点不要位于片段中央附近，要选取能够区分大小的位点；1、用连接的两种酶验证；2、参照单酶切。酶切验证方向的方法很灵活多变，具体情况具体分析。pCxsn-PtWRKY60的方向验证ATGGATGTCTTTCCCTCTTGCAAAGAAAAGGTGGAAGCTCTTCAATTCGAGTTGGAACACAGGCAGAAAGA

2、GAATGAAAGTCTTAGATTTATGCTTGGAGTTATGACCAGAAGATTCAGCATTCTTCAAGCCGAGATTCAAGAAACCGAAGAACATCAACAAAAGACAGCTAGCAACTTAGCGGATGGAGATCAAGCTTGTCATGAAATCCTTGACTCGAACAAGAGAGCAAGATTTGAAGTTCCCATAACCAAGGCATCGAGAATCTTGGTGAGAAGTCACTCCAATGACAAGAGCCTGATTGTGAAAGATGGATATCAATGGAGAAAGTATGGCCAGAAGGTTACTAAGGATAACCCA

3、TCACCTCGAGCTTACTTCAGGTGTTCCATGGCTCCTAATTGCCCCGTCAAGAAGAAGGTCCAAAGATGTGTAGAAGATGATTCAGTACTTGTTGCAAGCTATGATGGAGAACACAACCATGAACCCAATGGTTCACATGGACAATATTTATGTTCTCCACATACCTCATCATCAAAAATTTCCATAACTAATCATGTCCTCAAGTGTCCAATCGAAATTCCTCCTCTTCAACCATCTATAGCTCTTGATCTTACTCTTTCAAGTCCCAGTAATCAACAGAAGGAAAATC

4、CTTCTAAAAGATCCATGGAAGACTGCGGCAAGATTAATAATAACTGCAACAAGAACTACATTGAAGAATATGTGGCATCTTTAACTAAAGATCCTACCTTCTCTGTAGCTTTAGCTGCGGCTGTTGCAAGTTCAATGAGTGACCTGTCTTCGTCAAGAATGCTGTGAPtWRKY60CDS序列pCxsn载体NEBcutter分析片段上的酶切位点1cutters2cutters3cutters10ul体系酶切pCxsn-PtWRKY60Plasmid:8.75ul;Mbuffer:1ul;HindIII:0.

5、25ul.37℃水浴2-3h1541bp1117bpASS测序测序的样本可以为：菌液、质粒、PCR产物、其他；测序要提供测序引物；一次反应大约可测800bp的长度，如果目的片段超过这一长度可以选择测通、双向，或者是单向walking等方法。测序单测序结果波峰信号序列信息序列信息测序结果和原序列比对结果Identity=98.22%波峰信号谢谢！