nmda受体nr2b亚型基因对海马成年新生神经元形态发生的影响

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1、NMDA受体NR2B亚型基因对海马成年新生神经元形态发生的影响locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcameNMDA受体NR2B亚型基因对海马成年新生神经元形态发生的影响locatedintheTomb,DongShenJiab

2、ang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame摘要：目的研究NMDA受体NR2B亚型基因对海马成年新生颗粒细胞形态发生的影响。方法通过Creloxp重组酶系统构建NMDA受体NR2B亚型基因单细胞敲除模型。运用Neurolucida软件系统对野生型、NR2B基因敲除成年新生神经元进行形

3、态重建，观察树突长度、树突复杂度以及棘突的变化。结果NR2B基因敲除成年新生神经元外形与WT神经元相似，树突长度接近，棘突减少。Sholl分析显示在以胞体为中心，距胞体不同距离的树突亚区域内，树突复杂性（树突交叉）减低，与此同时棘突分布密度减低（P<0.05）。结论海马成年新生颗粒神经元NR2B基因敲除对新生细胞树突长度影响甚微，但降低了树突复杂性，减少棘突形成，从而导致了功能性整合入海马特定神经信息网络的障碍。　　关键词：成年神经发生；NMDA受体；NR2B亚型；形态发生　　中图分类号：R392文献标识码：A文章编号：16721349（2012）12149503　　成年神经

4、发生（adultneurogenesis）在哺乳动物前脑持续存在，脑卒中、癫痫、创伤、环境刺激、情绪等因素均会影响成年后神经发生。行为学证据表明[1，2]，海马成年神经发生对于海马某些形式的学习、记忆以及情绪调节非常重要。成年新生神经元，具有长时程增强（longtermpotention，LTP）、动作电位诱发阈值降低、兴奋性增高等神经活性[3]。海马癫痫为神经兴奋性增加的最常见的形式之一，也可以诱发增加成年神经发生：在红藻氨酸注射诱发的癫痫模型[4]和癫痫的点燃激发模型均能观察到神经发生增加[5]。而在匹罗卡品诱发癫痫模型中，通过阻滞成年神经发生可以减少自发性复发性癫痫的发

5、生[6]。因此，海马神经活性与成年神经发生之间存在着紧密的双向联系。　　而NMDA受体依赖型的长时程增强是成年神经发生中神经活性、突触可塑性的重要证据，被认为是海马空间记忆的神经生物机制[7，8]。Ge等[3]研究发现，LTP是依赖于NMDA受体NR2B亚型基因的。因此，研究NMDA受体NR2B亚型基因对海马成年新生神经元发育成熟过程的影响，对于进一步探讨新生神经元的功能、神经活性、海马依赖的学习和记忆分子机制，以及未来可能的治疗策略，均具有非常重要意义。　　本研究建立海马成年新生神经元NR2B基因敲除模型，观察NR2B基因敲除对成年新生神经元细胞形态、树突、棘突发育等的影响

6、，进一步阐明NR2B基因在海马成年发生中的重要作用。　　1材料与方法　　1.1实验动物与分组经基因型鉴定后的清洁级成年健康NR2Bfl/fl转基因小鼠[9]（NR2B基因被loxp序列标记），C57BL/6野生型小鼠（wildtype，WT），同济医学院实验动物中心提供，体重20g～30g。NR2Bfl/fl转基因小鼠为实验组，C57BL/6小鼠为WT对照组。　　1.2实验方法　　1.2.1海马成年新生神经元NR2B基因敲除模型制作运用逆转录病毒基因标记技术，利用Creloxp重组酶体系，建立海马成年新生神经元单细胞NR2B基因敲除模型。本实验采用的是逆转录病毒载体Molon

7、eyRSVpGFP：T2aCre（Dr.WolfgangKelsch馈赠）：带有一个来源于Roussarcomavirus内源性启动子RSV；pGFP与Cre基因由T2a序列连接，T2a序列保证了GFP基因与Cre基因的同时高效率表达[10]。　　当逆转录病毒注射入成年神经发生部位时（海马齿状回颗粒下层），感染带有loxp打靶基因NR2B的神经祖细胞/母细胞，当Cre酶激活时，Creloxp重组酶系统工作从而产生海马新生单细胞NR2B基因敲除模型。当Cre在NR2Bfl/fl转基因小鼠海马齿状回表达后，