大豆异黄酮对体外关节软骨细胞的影响

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1、天津医科大学硕士学位论文大豆异黄酮对体外关节软骨细胞的影响姓名：黄武君申请学位级别：硕士专业：外科学（骨外科）指导教师：白人骁20070501天津匮科大掌硬j舱文中文摘要大豆异黄酮对体外培养关节软骨细胞的影响中文摘要目的：探讨不同浓度大豆异黄酮对体外培养软骨细胞的影响，进一步揭示大豆异黄酮在骨性关节炎关节软骨退交中的作用。方法：1、取3周龄、雌性幼兔三只，无菌条件下切取股骨头、股骨髁部关节软骨，分离软骨细胞进行培养传代，将第一代软骨细胞随机分成阳性对照组(1713-E2组，如组)、阴性对照组(溶媒对照组)、lO'Smol／L～10"10mo

2、l／LSI组，共8组，分别以每孔2×i03个软骨细胞接种于96孔板，每组平行4孔；以每孔1×104个软骨细胞接种于24孔，每组平行3孔，每孔底部预先放入无菌5m×5mm盖玻片。48h细胞贴壁后予以不同浓度药物干预，隔天换药一次，每天取一块96孔板进行MTr测定，连续测定8天；药物干预一周后取出24孔板内盖玻片分别行雌激素13受体免疫组织化学染色、甲苯胺蓝染色和瑞氏染色。2、取第一代软骨细胞随机分成A、B两组，B组先用IL-[3I干预，每组又分成E2组、溶媒对照组、10弓mol／L～1040mol／LSI组，共8个亚组，以每孔2×105个细胞

3、接种于6孔培养板中，每亚组平行2孔，48h后，A组予以不同浓度药物干预5天，B组先以10ng／m1IL-pl干预24h后予以不同浓度药物干预5天，隔天换药一次。提取培养软骨细胞总RNA，RT-PCR检测I型胶原、II型胶原、biglycan、11G卜Bl、IGF--ImRNA表达情况。结果：1、MTr结果显示：各组24小时内作用无明显差异(少0．05)；10‘Smol／LSI组扶24小时后测得的oD值与溶媒对照组和E2组的OD值有显著性差别(仄0．05)．10'emol／L、10。10lnol／LSI组的0D值与与溶媒对照组的oD值无明显差

4、别，从24小时后测得的0D值与17p-E2组的0D值有显著性差别(仄0．05)．1ffTmol／I．、lo．8mol／L、10"9mol／LSI组从48小时后测得的∞值与溶媒对照组的oD值有显著性差别(JD(O．05)。雌激素B受体免疫组化显示未滴加一抗的爬片无棕黄色颗粒，其余各组均有雌激素P受体表达，阳性在体外培养的软骨细胞中有棕黄色深染颗粒存在于细胞浆和(或)细胞核内。甲苯胺蓝染色显示胞浆中有不同程度的紫红色颗粒，体外培养的软骨细胞中蛋白多糖存在。2、sI对软骨细胞mI{NA表达的影响：正常关节软骨细胞均有biglycan、II型胶原、

5、TGF_BlmRNA表达，lO'Tmol／L、10‘Smol／L、lO'gmol／LSI能刺激正常关节软骨细胞mRNA表达，而104mol／LSI则起抑制作用；IL--If)抑制软骨细胞biglycan、II型胶原、TGF-BlmRNA的表达，lO'Smol几SI能协同IL--1B起抑制作用，lO-7mol／L、lO'Smol／LSI能部分对抗IL--Ip的抑制作用。lO'Smol／L、104mol／L、10。7m01／LSI能刺激正常关节软骨细胞表达I型胶原mRNA表达，变性老化的软骨细胞都有I型胶原mRNA表达，其中10"8mol／L、

6、lo'gmol／LSI能部分对抗IL-IB的作用。10‘Vmol／L、lO-Smol／L、10"gmol／LSI能诱导关节软骨细胞表达IGF-ImRNA。lO'Tmol／k、10‘8mol／LSI能诱导变性关节软骨细胞表达IGF-lmP,NA。结论：l、不同浓度sI对软骨细胞增殖的作用表现出双重作用，10‘5mol／L的SI抑制软骨细胞的增殖；而10。7m01／L、104mol／L、10气01／L的SI促进软骨细胞的增殖，且随着浓度的增加作用增加。2、不同浓度SI对软骨细胞胶原、蛋白多糖、IGF-1、TGF—BlmRNA表达的作用不同。3、

7、体外关节软骨细胞存在雌激素受体，SI对软骨细胞的作用与雌激素有相似性，提示SI可能通过雌激素受体发挥作用。4、SI可促进软骨细胞的增殖，对胶原、蛋白多糖等的作用强于雌激素，为将SI用于oA的临床防治提供了一定的药理和药效学依据。5、SI和雌激素不同作用提示：(1)SI作用于雌激素a、且受体的比率可能与雌激素不同；(2)SI对软骨细胞的作用有与雌激素不同的作用途径。关键词：大豆异黄酮雌激素植物雌激素软骨细胞关节软骨骨性关节炎天津医科大掌司Et—e丈中文摘要ABSTRACTObjective：Toinvestigatetheeffectonth

8、echondrocyteswhichculturedinvitrowithsoyisoflavone．Torevealfurtherlytheroleofestrogeninth