兔颞下颌关节盘前移位后关节的适应性改建

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1、浙江大学硕士学位论文兔颞下颌关节盘前移位后关节的适应性改建姓名：冯剑颖申请学位级别：硕士专业：口腔医学（口腔临床医学）指导教师：谷志远2002.4.1兔颞下颌关节盘前移位后关节的适应性改建中文摘要／浙江大学医学院口腔临床医学专业＼项士研究生：冯剑颖、导师：谷志远教授第一部分兔颞下颌关节发育中软骨细胞外基质的基因表达●_I__I●●____。。___’’___I_●。。_-～___●_-__-。_II型胶原和蛋白多糖聚合体是软骨细胞外基质的重要成分，主要由软骨细胞分泌，是反映软骨细胞功能状态和评价细胞外环境的重要指

2、标。为了解兔颞下颌关节发育中软骨细胞外基质基因表达的动态改变，本实验采用随机引物法合成兔Ir型胶原和蛋白多糖聚合体的cRNA探针．制备5天、10天、15天、30天、45天、60天、120天龄日本大耳白兔颢下颌关节标本，通过原位杂交的方法检测不同年龄阶段关节区基质基因的表达。，结果显示，随着年龄增长，关节盘内胶原纤维出现并逐渐排列有序。30天时妊节盘后区首先出现幼稚的软骨细胞，蛋白多糖聚合体和II型胶原mRNA相继表达，且基因表达水平随年龄增长而增高，表达范围增至盘前带、中带和后带，至120天发育为成熟的纤维软骨。

3、5天时II型胶原和蛋白多糖聚合体卫RN^仅在髁突肥丈层软骨细胞胞浆内弱表达。随着增殖层细胞逐渐向肥大层软骨细胞分化，软骨厚度逐渐增加。至30天时，髁突软骨四层分化成形，髁突增殖层深层、肥大屠、钙化软骨层均可见II型胶原和蛋白多糖聚合体表达，纤维层不表达。此后基质基因表达逐渐增强，以髁突顶部受力区基因表达最强，沿后斜面表达逐渐减弱。关节盘软骨细胞分化过程中II型胶原和蛋白多糖聚合体两基因表达并非同步，说明二者的协调表达是软骨细胞表型成熟的重要标志。关节负荷可促进关节盘和髁突软骨细胞的分化和基质基因的表达，II型胶基

4、因表达的增强有助于软骨组织抵御日益增大的关节负荷。第二部分兔颞下颌关节盘前移位后关节区软骨细胞外基质基因和曼自塞鋈的改变多糖聚合体(AnteriorDiscDisplacement，^DD)是颢下领关节紊乱病arjointdisorder，m)最常见的类型．ADD后关节区可出现适应性改建，表现为关节盘双板区出现软骨样细胞和致密结缔组织，髁突软骨的形态和结构发生改变。但这些新生的软骨样细胞是否具有软骨细胞的特性，软骨翘胞的功能状态和基质合成水平对TMD病程转归有何意义，且前尚不明确。厂本实验采用日本大耳白兔40只，

5、手术组28只，在不打开关节囊的前提下建立右侧ADD动物模型，分别于术后4天、1周、2周、4周、6周、8周、12周各处死4只。模拟手术组10只，在右侧颢下颌关节区作模拟手术，但不移动关节盘，空白对照组2只，未做任何处理．标本分别行呱染色、II型胶原和蛋白多糖聚合体mRNA原位杂交、II型胶原免疫组化染色和AlcianBlue染色。／结果显示．II型胶原和蛋白多糖聚合体mRNA在正常关节盘的前带、中带和后带的软骨细胞内均为强表达，双板区II型胶原不表达。术后手术侧关节盘首先出现以破坏为主的变化，4周后双扳区内纤维密度

6、增加，出现肥大的软骨样细胞。经原位杂交和免疫组化证实．这些新生的细胞表达软骨细胞所特有的II型胶原和蛋白多糖聚合体mRNA，具有合成软骨细胞外基质的功能。对照组髁突的增殖层深层、肥大层和钙化层细胞胞浆内可见大量II型胶原和蛋白多糖聚合体mRNA表达。术后l至2周手术侧髁突厚度明显变薄．蛋白多糖聚合体开始下调，随后增殖层分化活跃，6周后髁突厚度恢复，蛋白多糖聚合体表达回复至正常水平。II型胶原4周后开始持续下降，其表达下降程度较蛋白多糖聚台体显著，8周后逐渐回复正常。II型胶原和蛋白多糖聚合体蛋白在正常髁突肥2大层

7、浅层软骨细胞间质内强表达，术后二者表达下降和回升的时间与mRNA表达相似．研究结果证实．ADD后．双板区可在关节负荷的作用下出现纤维化和软骨细胞化生，合成软骨细胞外基质成为类似纤维软骨样组织，以行使关节盘的作用。髁突功能负荷改变时，首先出现破坏性反应，雠突软骨变薄，基质基因表达一过性下降．随着增殖层细胞的增殖分化和新生的软骨细胞基质合成能力的逐渐提高，髁突的适应性改建成功。可见，ADD．后破板区和髁突发生适应性改建以适应新的盘突关系是TMD病程转归之一。，第三部分兔颞下颌关节盘前移位后关节软骨细胞的凋亡改变及其意

8、义凋亡又称程序性死亡，在个体发育、维持机体内环境稳定和组织改建等方面具有重要的生物学意义。本实验的目的在于探讨ADD后软骨细胞凋亡的改变，了解凋亡与关节区适应性改建的关系．I标本制各同第二部分，采用原位末端标记法(TuNEL法)观察术后不同病变时蝇关节区组织学的改变和软骨细胞凋亡的情况．结果显示对照组TMJ仅在攥突增殖层和肥大层偶见凋亡细胞。手术组术后l至2周为髁突软骨细