山羊颞下颌关节盘细胞体外培养和表征

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1、兰州大学硕士研究生学位论文山羊颞下颌关节盘细胞体外培养和表征摘要目的：通过山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞的分离、培养、鉴定，观察关节盘纤维软骨细胞的分离及体外扩增的条件和体外培养的生物学特性，研究其生物学特性及组织工程的细胞学基础；对关节盘进行分区，定量计数各区中细胞数目，表征颞下颌关节盘中细胞的分型及分布，比较细胞体外培养后与原组织的差异，为颞下颌关节盘组织工程研究莫定基础。方法：1、无菌条件下切取1月龄山羊颞下颌关节盘，剪碎后用Ⅱ型胶原酶消化14h，过滤后获得关节盘纤维软骨细胞。在倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化及贴壁率，测定其生

2、长曲线，甲苯胺蓝染色、I型胶原免疫组化染色鉴定，透射电镜观察细胞超微结构。2、完整切取山羊双侧颞下颌关节盘，按内外侧向及前后向分别等分为三部分和两部分，将关节盘分为六份。标记后用10％中性福尔马林固定24h，石蜡包埋后用组织学、免疫组化及电镜技术检测山羊颢下颌关节盘。HE染色观察关节盘各带细胞类型及数目的不同，甲苯胺兰染色、I型胶原免疫组化检测胶原的分布，透射电镜观察细胞超微结构。结果：I、原代培养的关节盘纤维软骨细胞4h可观察到贴壁细胞，6h开始伸展变形，24h基本全部贴壁，大部分细胞为圆三角形和多角形，小部分为长梭形，第7天时细胞

3、彼此相连，铺满瓶底，细胞以长梭形为主，部分多角形。传代后12h贴壁率达90％大部分为多角形，5～6d即可长满瓶底。甲苯胺蓝染色和I型胶原免疫组化染色结果阳性。超微结构显示细胞内线粒体、内质网发达。2、颞下颌关节盘由不均分布的细胞和胶原纤维组成。胶原几乎都为I型，胶原纤维一般表现为波浪形或卷曲状，纤维大致平行，而细胞散在胶原纤维基质中。细胞有成纤维细胞样细胞和软骨细胞样细胞两种，其中前者占优势，两者比例约为2．05：1。细胞类型和分布在各区没有显著性差异。电镜超微结构显示成纤维细胞样细胞核大，梭形或兰州大学硕士研究生学位论文不规则形，细

4、胞器很少。软骨细胞样细胞胞核圆形或椭圆形，周围有电子透射区，细胞囊不明显，伪足少见。结论：1、体外分离培养的山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞具有较强的增殖能力，1～3代细胞可作为颞下颌关节盘组织工程的种子细胞。2、1月龄山羊颞下颌关节盘内各个区域的细胞类型、数目与排列没有显著性差异。其中成纤维细胞样细胞较软骨细胞样占优势。关键词：1月龄山羊颞下颌关节盘细胞类型细胞培养组织工程Ⅱ兰州大学硕士研究生学位论文CharacterizationandinvitroCultureofGoatTemporomandibularJointDiscCell

5、sAbstractObjective：Toobservetheconditionsofseparationandamplificationofcellsfromone··month--oldgoattemporomandibularjoint(TMJ)discbyisolation，cultureandidentificationoftheTMJcellsandtoobservethebiologicalcharacteristicsofculturedfibrochondrooytes．TheTMJdiscswcrcdividedi

6、ntoseveralpartsandcelltypeanddistributionwcl"echaracterizedregionallyintheTM3disc．Thedifferencesofculturedcellsandcellsintissuewerecompared．TheseworksmayprovidecertainbasisforproceedingTMJdisctissueengineeringdesign．Metho出：1．Thesmallpieces(1．0mm’insize)ofisolatedandchop

7、pedTM3disc，whichWasdissectedfromtwoone-month-goatsundersterileconditions，woredigested埘t110．1％typeIIcollagenasefor14h．ThesolutionWasfiltered、历ⅡI200meshfilterandcollected．MorphologicalchangesandattachmentefficiencyWereconstantlyobservedwiⅡIphase—contrastmicroscopeinordert

8、oplotthegrowthcurve．ImmunohistochemioalstainingfortypeIcollagenaswellastoluidinebluestainingwereperformed．Ultr