SNT1447-2011猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范.pdf

《SNT1447-2011猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１４４７—２０１１代替ＳＮ／Ｔ１４４７．１—２００４，ＳＮ／Ｔ１４４７．２—２００５猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉犻狀犳犲犮狋犻狅狌狊狆犾犲狌狉狅狆狀犲狌犿狅狀犻犪狅犳狊狑犻狀犲２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范ＳＮ／Ｔ１４４７—２０１１中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ

2、．ｃｎ电话：６８５２３９４６６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６印张１．５字数４１千字２０１１年１２月第一版２０１１年１２月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２２６１１定价２４．００元标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１４４７—２０１１前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ／Ｔ１４４７．１—２００４《猪传染性胸膜肺炎阻断酶联免疫吸附试验》、ＳＮ／Ｔ１４４７．２—２００５《猪胸膜肺炎放线杆菌聚合酶链式反应操作规程》。本标准与ＳＮ／Ｔ１４４７．１—２００４和Ｓ

3、Ｎ／Ｔ１４４７．２—２００５相比，主要技术变化如下：———增加了细菌分离鉴定；———补体结合试验。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王巧全、李树清、张强、李健、胡永强、刘俊平、熊炜。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：———ＳＮ／Ｔ１４４７．１—２００４；———ＳＮ／Ｔ１４４７．２—２００５。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１４４７—２０１１猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范１范围本标准规定了猪传染性胸膜肺炎的细菌分离鉴定、聚合酶链式反应、补体结合试验、阻断酶联

4、免疫吸附试验等实验室检测的操作程序及技术要求。本标准适用于猪传染性胸膜肺炎的检疫、诊断、流行病学调查和免疫监测。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ１８０８８出入境动物检疫采样。３疾病简介参见附录Ａ。４现场检疫及采样４．１现场检疫逐头进行临床检查，根据动物病情、临床表现和特异性病理变化做出初步诊断。４．２采样４．２．１病料的采集标准按ＧＢ／Ｔ１８０８８规定采样。４．２．２活体病料采集用棉拭子采鼻腔分泌物，放入无菌试管中送实验室进行检验。４．２．３

5、组织样品的采集无菌采集具有典型病变的肺气管、肺门淋巴结、扁桃体。４．２．４血样的采集制备无菌操作采集动物血，每头不少于１０ｍＬ。自然凝固后无菌分离血清，分装，加盖密封后冷藏保存。５实验室诊断５．１总则对该病可以进行细菌分离鉴定、分子生物学或血清学检查等。１标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１４４７—２０１１其中细菌分离、聚合酶链式反应主要检病原，补体结合试验、酶联免疫吸附试验主要检抗体。５．２细菌分离鉴定５．２．１试剂营养琼脂、血琼脂、巧克力琼脂、类胸膜肺炎微生物（ＰＰＬＯ）琼脂。５．２．２病原分离将样品按常规分离要求直接接种到血琼脂表面，再

6、用鸡表皮葡萄球菌作交叉划线于３７℃含５％二氧化碳（ＣＯ２）下培养。继代培养用巧克力琼脂和ＰＰＬＯ琼脂进行培养。５．２．３病原鉴定培养形态及染色特性：于血琼脂平板培养２４ｈ～４８ｈ，胸膜肺炎放线杆菌（ＡＰＰ）为露珠样的小菌落，直径１ｍｍ～２ｍｍ。多数菌株产生β溶血带，靠近鸡表皮葡萄球菌菌苔的菌落较大，随着与葡萄球菌生长线的距离增加而变小或不生长，即所谓“卫星现象”。取典型菌落作革兰氏染色，应为革兰氏阴性小球杆菌，两极着色继代培养中呈明显多形态，幼龄培养物中偶有成丝状。５．２．４判定被分离菌具有以下特点即可初步判定为猪胸膜肺炎放线杆菌：———染色镜检为革兰氏阴性杆菌或多形态；———在血琼脂培

7、养基上生长具有溶血现象；———生长培养需要ｖ因子，即具有“卫星现象”；———被检菌生化特性：尿素酶试验为阳性，能分解Ｄ木糖、甘露醇，不分解棉子糖、阿拉伯胶糖。５．３猪胸膜肺炎放线杆菌聚合酶链式反应５．３．１设备和材料５．３．１．１仪器设备５．３．１．１．１ＰＣＲ扩增仪。５．３．１．１．２电泳仪。５．３．１．１．３凝胶成像系统。５．３．１．２试剂５．３．１．２．１三蒸水０．１０３ＭＰａ灭菌１５ｍｉｎ。５．３．１．２．２吐温２０（Ｔ