SNT1086-2011牛生殖道弯曲杆菌病检疫技术规范.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１０８６—２０１１代替ＳＮ／Ｔ１０８６—２００２牛生殖道弯曲杆菌病检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉犫狅狏犻狀犲犵犲狀犻狋犪犾犮犪犿狆狔犾狅犫犪犮狋犲狉犻狅狊犻狊２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１０８６—２０１１前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ／Ｔ１０８６—２００２《胎儿弯杆菌的分离鉴定方法》。本标准与ＳＮ／Ｔ１

2、０８６—２００２相比，主要技术变化如下：———修改了标准名称；———增加了间接荧光抗体检测方法和ＰＣＲ检测方法。本标准参考了世界动物卫生组织（ＯＩＥ）《陆生动物诊断试验和疫苗手册（哺乳动物、禽鸟与蜜蜂）》（２００９版）（ＭａｎｕａｌｏｆＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＴｅｓｔｓａｎｄＶａｃｃｉｎｅｓｆｏｒＴｅｒｒｅｓｔｒｉａｌＡｎｉｍａｌｓ２００９）第２．４．５章内容。主要修改如下：———本标准采用了ＯＩＥ规定的病原分离鉴定方法、间接荧光抗体检测方法、ＰＣＲ检测方法；———本标准删除了ＯＩＥ中提到ＥＬＩＳＡ方法。本标准由国家认证认可监督管理委

3、员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人：侯艳梅、郭福生、秦贞奎、霍蕾、栾慎顺。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：———ＳＮ／Ｔ１０８６—２００２。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１０８６—２０１１牛生殖道弯曲杆菌病检疫技术规范１范围本标准规定了牛生殖道弯曲杆菌病的检疫技术要求。本标准适用于牛生殖道弯曲杆菌病病原的分离鉴定，可用于该病的检疫、诊断和流行病学调查。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件

4、，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法３缩略语ＴＥＭ：增菌运输培养基ＣＨ：半胱氨酸牛心浸膏培养基ＭＨ：ＭｕｌｌｅｒＨｉｎｔｏｎ琼脂培养基４设备和材料４．１混合气体（质量比为３．５％Ｏ２、１０％ＣＯ２、８６．５％Ｎ２）。４．２厌氧培养罐。４．３采样棒及吸球。４．４凝胶成像系统。５培养基和试剂见附录Ａ。实验用水应符合ＧＢ／Ｔ６６８２的要求。６病原分离与鉴定６．１样品采集６．１．１公牛包皮垢及精液消毒清洗公牛尿道口后，将采样棒的采样端

5、插入阴筒内，将另一端的吸球压扁并来回抽动，吸取包皮液，取出采样棒迅速插入盛有３ｍＬＰＢＳ液的小瓶中吹吸数次后，立即封口。包皮冲洗时，用２０ｍＬ～３０ｍＬＰＢＳ液注入包皮囊内，用力摩擦１５ｓ～２０ｓ后，将注入液体收集到无菌瓶内，立即封口；包皮垢亦可在采精后从假阴道中收集，即用２０ｍＬ～３０ｍＬＰＢＳ液冲洗假阴道获得。１标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１０８６—２０１１精液应在无菌条件下采集，采集的精液装入无菌瓶内，立即封口。６．１．２母牛阴道粘液消毒清洗阴门区后，将采样棒的采样端插入阴

6、道，将另一端的吸球压扁并来回抽动，吸取阴道粘液，取出采样棒迅速插入盛有３ｍＬＰＢＳ液的小瓶中吹吸数次后，立即封口；也可用无菌注射器连接一根无菌导管将２０ｍＬ～３０ｍＬＰＢＳ液注入阴道腔内，来回抽动冲洗４次～５次，然后将液体收集到无菌瓶内，立即封口；阴道腔冲洗液亦可采用将无菌ＰＢＳ液注入阴道腔内５ｍｉｎ～１０ｍｉｎ后塞入无菌纱布块吸取的方法而收集。６．１．３流产胎儿、胎盘当有临床症状（参见附录Ｂ）发生流产时，在无菌条件下采集胎盘、胎儿胃内容物、肝及肺等。采集后直接放入运输增菌培养基中，或者放入含１％福尔马林的ＰＢＳ中，用于进行免疫荧

7、光测定。６．１．４样品镜检样品同时涂片做革兰氏染色镜检。６．２样品运输样品采集后，应４℃～８℃保存，并在４８ｈ内送至实验室；或将样品液静置１ｍｉｎ～２ｍｉｎ后，用灭菌注射器吸取２ｍＬ上清液，分别注入两瓶ＴＥＭ中，每瓶１ｍＬ，振荡混匀，４８ｈ内送至实验室。６．３样品处理６．３．１生殖道粘液处理如果不是很粘稠，可以直接接种，或用等体积ＰＢＳ液稀释后接种；如果很粘稠则需要加入等体积的半胱氨酸处理液（１００ｍＬ水中加入０．２５ｇ盐酸半胱氨酸，调ｐＨ７．２后，用滤膜除菌使用），１５ｍｉｎ～２０ｍｉｎ后可用于接种。６．３．２包皮或阴道冲洗液处

8、理３５００犵离心浓缩至２５０μＬ接种。６．３．３胎儿胃内容物及胎儿内脏或组织处理胎儿胃内容物可直接接种；胎儿内脏或组织则先用火焰作表面灭菌并用组织匀浆机匀浆后接种。６．３．４胎盘膜处理胎盘膜用ＰＢＳ冲洗后，去除表面污染物，刮取绒膜、绒毛接种。以上处