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《snt 1086-2011 牛生殖道弯曲杆菌病检疫技术规范》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖/犜1086—2011代替SN/T1086—2002牛生殖道弯曲杆菌病检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉犫狅狏犻狀犲犵犲狀犻狋犪犾犮犪犿狆狔犾狅犫犪犮狋犲狉犻狅狊犻狊20110531发布20111201实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖/犜1086—2011前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1086—2002《胎儿弯杆菌的分离鉴定方法》。本标准与SN/T1086—2002相比,主要技术变化如下:———修改了标准名称;———增加了间接荧光抗体检测方法和P
2、CR检测方法。本标准参考了世界动物卫生组织(OIE)《陆生动物诊断试验和疫苗手册(哺乳动物、禽鸟与蜜蜂)》(2009版)(ManualofDiagnosticTestsandVaccinesforTerrestrialAnimals2009)第2.4.5章内容。主要修改如下:———本标准采用了OIE规定的病原分离鉴定方法、间接荧光抗体检测方法、PCR检测方法;———本标准删除了OIE中提到ELISA方法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人:侯艳梅、郭福生、秦贞奎、霍蕾、栾慎顺。本标准所代替标准
3、的历次版本发布情况为:———SN/T1086—2002。Ⅰ犛犖/犜1086—2011牛生殖道弯曲杆菌病检疫技术规范1范围本标准规定了牛生殖道弯曲杆菌病的检疫技术要求。本标准适用于牛生殖道弯曲杆菌病病原的分离鉴定,可用于该病的检疫、诊断和流行病学调查。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3缩略语TEM:增菌运输培养基CH:半胱氨酸牛心浸膏培养基MH:MullerHinton琼脂培养基4设备和材料4
4、.1混合气体(质量比为3.5%O2、10%CO2、86.5%N2)。4.2厌氧培养罐。4.3采样棒及吸球。4.4凝胶成像系统。5培养基和试剂见附录A。实验用水应符合GB/T6682的要求。6病原分离与鉴定6.1样品采集6.1.1公牛包皮垢及精液消毒清洗公牛尿道口后,将采样棒的采样端插入阴筒内,将另一端的吸球压扁并来回抽动,吸取包皮液,取出采样棒迅速插入盛有3mLPBS液的小瓶中吹吸数次后,立即封口。包皮冲洗时,用20mL~30mLPBS液注入包皮囊内,用力摩擦15s~20s后,将注入液体收集到无菌瓶内,立即封口;包皮垢亦可在采精后从假阴道中收集,即用20mL~30mLPB
5、S液冲洗假阴道获得。1犛犖/犜1086—2011精液应在无菌条件下采集,采集的精液装入无菌瓶内,立即封口。6.1.2母牛阴道粘液消毒清洗阴门区后,将采样棒的采样端插入阴道,将另一端的吸球压扁并来回抽动,吸取阴道粘液,取出采样棒迅速插入盛有3mLPBS液的小瓶中吹吸数次后,立即封口;也可用无菌注射器连接一根无菌导管将20mL~30mLPBS液注入阴道腔内,来回抽动冲洗4次~5次,然后将液体收集到无菌瓶内,立即封口;阴道腔冲洗液亦可采用将无菌PBS液注入阴道腔内5min~10min后塞入无菌纱布块吸取的方法而收集。6.1.3流产胎儿、胎盘当有临床症状(参见附录B)发生流产时,
6、在无菌条件下采集胎盘、胎儿胃内容物、肝及肺等。采集后直接放入运输增菌培养基中,或者放入含1%福尔马林的PBS中,用于进行免疫荧光测定。6.1.4样品镜检样品同时涂片做革兰氏染色镜检。6.2样品运输样品采集后,应4℃~8℃保存,并在48h内送至实验室;或将样品液静置1min~2min后,用灭菌注射器吸取2mL上清液,分别注入两瓶TEM中,每瓶1mL,振荡混匀,48h内送至实验室。6.3样品处理6.3.1生殖道粘液处理如果不是很粘稠,可以直接接种,或用等体积PBS液稀释后接种;如果很粘稠则需要加入等体积的半胱氨酸处理液(100mL水中加入0.25g盐酸半胱氨酸,调pH7.2后
7、,用滤膜除菌使用),15min~20min后可用于接种。6.3.2包皮或阴道冲洗液处理3500犵离心浓缩至250μL接种。6.3.3胎儿胃内容物及胎儿内脏或组织处理胎儿胃内容物可直接接种;胎儿内脏或组织则先用火焰作表面灭菌并用组织匀浆机匀浆后接种。6.3.4胎盘膜处理胎盘膜用PBS冲洗后,去除表面污染物,刮取绒膜、绒毛接种。以上处理液接种到增菌运输培养基上。6.4胎儿弯曲杆菌的分离培养6.4.1将已接种样品的增菌运输培养基,置37℃培养72h,取出振荡并无菌操作,用接种环分别取一环,划线接种于两个MH或CH琼脂平板培养基上,将
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