Nrf2在叶酸诱导的急性肾损伤中的作用机制研究

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1、分类号：R692.6单位代码：10159密级：公开学号：201520202硕士学位论文（硕士学术论文）中文题目：Nrf2在叶酸诱导的急性肾损伤中的作用机制研究英文题目：MechanismofNrf2infolicacid-inducedacuterenalinjury论文作者：张诗文指导教师：周华教授学科专业：内科学完成时间：2018年2月中国医科大学硕士学位论文Nrf2在叶酸诱导的急性肾损伤中的作用机制研究MechanismofNrf2infolicacid-inducedacuterenalinjury论文作者张诗文指导教师周华教授申请学位医学硕士培养单位附属第一临床学院一级学

2、科内科学二级学科肾内科研究方向急性肾损伤论文起止时间2015年10月—2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年3月III中国医科大学硕士学位论文Nrf2在叶酸诱导的急性肾损伤中的作用机制研究摘要目的：急性肾损伤是目前已被公认的一种常见的临床综合征。Nrf2是在氧化应激水平上维持细胞的重要的调节因子，正常细胞通过其介导的抗氧化反应体系抵抗外源性和内源性氧化应激，从而提高细胞的抗氧化功能。普遍认为，氧化应激导致了AKI的发生，目前已经有研究证明Nrf2在肾脏损伤中具有保护作用。所以本实验研究的目的是探讨Nrf2在叶酸诱导的急性肾损伤中的作用机制。从Nrf2

3、的氧化应激，炎症水平，凋亡，铁死亡和叶酸代谢等通路入手，尝试为AKI研究提供新线索。研究方法：本研究以Nrf2全身敲除(Nrf2-/-)小鼠和C57BL/6(Nrf2+/+)小鼠为研究对象，实验组静脉注射100mg/kg剂量的叶酸，对照组注射相同剂量的NaHCO3，诱导小鼠发生急性肾损伤。48小时后收取小鼠肾组织，一部分做石蜡切片，病理染色PAS、HE、TUNEL,另一部分提取蛋白以及RNA行分子生物学检查，包括：焦亡蛋白caspase1行Westernblot检测，相关基因Nqo1，Gclc，Gclm，IL6，Tnfα，caspase1,pycard和Txnip-1/2行RT-q

4、PCR检测，以期明确急性肾损伤组织中Nrf2的作用情况。结果：注射叶酸48小时后，1、Nrf2+/+小鼠和Nrf2-/-小鼠中的肾脏体积均增大，血清尿素氮和肌酐水平都较对照组明显升高，且Nrf2-/-小鼠水平更高具有统计学差异。2、石蜡切片HE和PAS染色显示，Nrf2+/+小鼠和Nrf2-/-小鼠肾脏病理出现急性肾损伤，且Nrf2-/-小鼠更重。PAS染色定量分析，得出Nrf2-/-小鼠的病理损伤更重。3、叶酸组，抗氧化应激基因Nqo1,Gclc,Gclm的mRNA的表达下调，且Nrf2-/-组基因下调水平更显著。提示Nrf2的缺失抑制抗氧化应激反应。4、Nrf2-/-小鼠中IL

5、-6和TNF-α的mRNA水平升高的程度具有统计学差异。5、TUNEL染色显示，Nrf2-/-小鼠的凋亡程度明显多于Nrf2+/+小鼠。6、叶酸组中Nrf2-/-小鼠的GPX4的mRNA水平较Nrf2+/+小鼠明显下调，ACSL4的mRNA水平较Nrf2+/+小鼠有上调趋势。7、叶酸组的MthfdmRNA的表达水平明显升高，但Nrf2+/+与Nrf2-/-组无差异。结论：1、Nrf2对叶酸诱导的急性肾损伤具有保护作用。2、Nrf2在叶酸诱导的急性肾损伤中的作用机制可能是：Nrf2抑制炎性因子，Nrf2抑制氧化应激，Nrf2抑制凋亡，Nrf2抑制铁死亡。关键词：急性肾损伤；Nrf2；

6、叶酸；氧化应激；炎症；凋亡；铁死亡课题资助：国家自然科学基金（N0.81370835）III中国医科大学硕士学位论文AbstractObjective:AKIisacommonclinicalsyndrome.Nrf2isaregulatoryfactorinmaintainingcellsatoxidativestresslevel.Throughitsmediatedantioxidantresponsesystem,normalcellsresistexogenousandendogenousoxidativestress,whichenhancestheantioxidan

7、tfunctionofthecells.ItisgenerallybelievedthatoxidativestressleadstotheoccurrenceofAKI.IthasbeenprovedthatNrf2hasprotectiveeffectonrenalinjury.SothisstudyisabouttheroleandthemechanismofNrf2infolicacid-inducedAKI.Methods:Inthisstudy,Nrf2k