脂肪来源基质血管细胞混合物修复大鼠膝关节软骨缺损的实验研究

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1、分类号：R873.5单位代码：10159密级：公开学号：201520323硕士学位论文中文题目：脂肪来源基质血管细胞混合物修复大鼠膝关节软骨缺损的实验研究英文题目：Theexperimentalstudyofadipose-tissuederivedstromalvascularfractionforarticularcartilageofthekneerepairinrat.论文作者：陈鹏指导教师：李旭教授学科专业：运动医学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文中国医科大学硕士学位论文脂肪来源基质血管细胞混合物修复大鼠膝关节软骨缺损的实验研究Theexperimentalstud

2、yofadipose-tissuederivedstromalvascularfractionforarticularcartilageofthekneerepairinrat.论文作者陈鹏指导教师李旭教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科医学二级学科运动医学研究方向软骨修复与再生论文起止时间2016年3月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月II中国医科大学硕士学位论文中国医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成果，论文中除加以标注的内容外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果

3、，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本研究提供贡献的其他个人和集体均已在文中进行了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：年月日中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密（），在年后解密适用本授权书。（保密：请在括号内划“√”）论文作者签名：指导教师签名：日期：年月

4、日日期：年月日III中国医科大学硕士学位论文摘要目的：关节软骨缺乏血管神经的分布，导致其自我修复和再生能力弱。现阶段临床应用的软骨缺损修复方法均存在不同程度的缺点。组织工程的应用为更好的实现软骨修复与再生带来了新的思路。脂肪组织来源的基质血管细胞混合物（AdiposeTissue-derivedStromalVascularFraction,AT-SVF）是一种新兴的具有干细胞特性的细胞混合物。在前期研究中展现出对软骨细胞生长分化及关节功能改善的积极作用。本研究将进一步探索自体AT-SVF用于修复SD大鼠关节软骨缺损的可行性及其修复效果。方法：在无菌环境下从大鼠腹股沟区获取脂肪组织，采用传统

5、的胶原酶处理法获取自体AT-SVF。体外培养采用流式细胞术和三系诱导分化检验其干细胞特性。建立SD大鼠右侧膝关节股骨滑车处的全层软骨缺损模型，缺损直径为2mm深1.5mm。实验共分为5组，每组14只大鼠，采用单次手术方式，按照缺损区密封物的不同分为：A组，空白组，缺损作旷置处理；B组，纤维蛋白胶组，缺损区仅用纤维蛋白胶密封；C组，AT-SVF组，缺损区植入AT-SVF并用纤维蛋白胶密封；D组，软骨细胞外基质源性微粒（CartilageExtracellularDerivedParticles,CEDPs）组，缺损区植入CEDPs并用纤维蛋白胶密封；E组：AT-SVF+CEDPs组，缺损区植入

6、AT-SVF与CEDPs的混合物并用纤维蛋白胶密封。术后6周、12周取材，采用Micro-CT分析系统评估缺损部位软骨下骨的重塑情况。参考国际软骨修复协会软骨修复大体评分系统（InternationalCartilageRepairSocietyMacroscopicEvaluationofCartilageRepair，ICRS-MECR）评价大体观察的软骨缺损修复情况。标本固定切片处理后进行病理学染色，参考Wakitani评分系统进行组织学评分，分析评价缺损区软骨的修复情况。结果：流式细胞术和三系诱导分化实验显示AT-SVF体外培养的细胞具备干细胞的表征并可在特定培养条件下向多系细胞分化

7、。Micro-CT系统分析结果显示实验各分组均出现不同程度的软骨下骨重塑表现，AT-SVF组和AT-SVF+CEDPs组的骨体积分数（BoneVolumeFraction,BVF）、骨小梁厚度（TrabecularThickness,Tb.Th）较其他各组高（P＜0.05），软骨下骨重塑程度和效果好。组织学分析显示AT-SVF组和AT-SVF+CEDPs组软骨缺损区新生组织主要为透明软骨分布，其余各组为透明软