RIPK4在非小细胞肺癌的表达及意义

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1、国医科中国中分类号：R734.2单位代码：10159密级：公开学号：201520067硕士学位论文中文题目：RIPK4在非小细胞肺癌的表达及意义英文题目：TheexpressionandsignificanceofRIPK4innon-smallcelllungcancer论文作者：金艾琳指导教师：孙丽梅教授学科专业：病理学与病理生理学完成时间：2018年3月月I中国医科大学硕士学位论文RIPK4在非小细胞肺癌中的表达及意义TheexpressionandsignificanceofRIPK4i

2、nnon-smallcelllungcancer论文作者金艾琳指导教师孙丽梅教授申请学位医学硕士培养单位基础医学院一级学科基础医学二级学科病理学与病理生理学研究方向肺癌的发生与发展论文起止时间2016年3月—2018年3月论文完成时间2018年5月中国医科大学（辽宁）2018年3月中国医科大学硕士学位论文中国医科大学硕士学位论文摘要目的：探讨RIPK4(受体相互作用蛋白激酶4)蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其与细胞周期蛋白之间关系，揭示RIPK4可能与诱导肺癌细胞增殖的关系。研究方法：一、材料

3、，111例非小细胞肺癌组织蜡块来自于2013-2015年间中国医科大学附属第一医院手术切除的存档蜡块，患者术前均未接受过任何化学或放射治疗。标本均经10％福尔马林液固定后，进行常规的石蜡包埋。二、主要试剂和来源，兔抗人RIPK4多克隆抗体购买自SantaCruz公司；SP免疫组化试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司；RIPK4质粒及干扰片段购自Origene公司。三、方法，应用免疫组织化学染色(SP法)检测111例非小细胞肺癌组织中RIPK4的表达及定位。细胞培养，本研究

4、采用人肺癌细胞系A549，H1299，HBE，SK，292，H661和H460等，在设置为37℃、5％C02饱和湿度的孵箱中，用含10%新鲜小牛血清的DMEM或RPMI1640培养基进行细胞培养。并运用质粒转染技术使肺癌细胞H1299中RIPK4过表达，采用Westernblot方法观察细胞周期蛋白等多种蛋白的变化情况。同理，运用siRNA干扰技术下调肺癌细胞H1299中RIPK4的表达，观察周期蛋白的变化情况，分析RIPK4表达与细胞增殖的关系。用实时定量PCR检测细胞周期蛋白分子水平的表达。

5、此外，用MTS技术和细胞集落实验检测功能学变化，进一步分析与验证RIPK4表达与肿瘤细胞增殖的关系。四、统计学分析，运用SPSS（PASW）l7．0统计学分析软件，对RIPK4表达与临床病理因素的关系进行分析，由t检验完成，以a=0．05为水准，P<0．05为有统计学意义。结果：1.用免疫组织化学实验检测111例非小细胞肺癌组织中RIPK4蛋白的表达情况，并证明其定位在细胞浆中。2.Westernblot方法检测RIPK4在A549，H1299，HBE，SK，292，H661和H460等肺癌细胞

6、系中的表达情况，选择表达中等的H1299细胞系进行实验。3.在H1299细胞系中过表达RIPK4，CyclinD1等细胞周期蛋白同样表达增加；同理在H1299细胞系中干扰掉RIPK4则有相反的表现。4.体外功能学实验MTS显示，转染RIPK4质粒后，肿瘤细胞增殖能力增强高于对照组。细胞集落实验也表明，与对照组相比转染RIPK4质粒组，肿瘤细胞增殖能力强于对照组；而RIPK4干扰组与对照组相比，肺癌细胞的增殖能力降低。结论：1.RIPK4在肺癌组织中表达并定位在细胞浆中，并且在腺癌中高表达。2.R

7、IPK4能影响细胞周期蛋白的表达并与其成正相关，RIPK4的过表达可能促进肿中国医科大学硕士学位论文瘤细胞的增殖。关键词：RIPK4；细胞周期蛋白；非小细胞肺癌；增殖国医科中国中国大学中国医科大学硕士学位论文AbstractObjective:ToinvestigatetheexpressionofRIPK4(receptor-interactingproteinkinase4)proteininnon-smallcelllungcancer(NSCLC)anditsrelationshipwi

8、thcyclins,andtorevealtherelationshipbetweenRIPK4withlungcancercellproliferation.Methods:111casesofnon-smallcelllungcancertissueparaffinblockswereobtainedfromthefirstaffiliatedhospitalofChinaMedicalUniversityfrom2013to2015.Alltheparaffinblockswereremo