TRPC6在急性高血压小鼠足细胞损伤中作用机制的研究

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1、中国医科大学硕士学位论文分类号：R692.9单位代码：10159密级：公开学号：117429硕士学位论文（临床医学七年制研究生）中文题目：TRPC6在急性高血压小鼠足细胞损伤中作用机制的研究英文题目：ResearchofmechanismofTRPC6podocytesunderacutehypertensioncondition论文作者：朱思源指导教师：李子龙教授学科专业：内科学（肾脏内科）完成时间：2018年3月I中国医科大学硕士学位论文中国医科大学硕士学位论文TRPC6在急性高血压小鼠足细胞损伤中作用机制的研究Researchof

2、mechanismofTRPC6podocytesunderacutehypertensioncondition论文作者朱思源指导教师李子龙教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科内科学研究方向肾脏病学论文起止时间2017年4月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月I中国医科大学硕士学位论文摘要背景：肾小球是血液的“过滤器”，而在其中包含的固有细胞有三个类别，它们分别是：内皮细胞、系膜细胞以及足细胞，而在它们当中足细胞是终末分化细胞的其中一类，其表型稳定,足细胞损伤是慢性肾脏

3、病出现及进展的主要环节。足细胞在刺激下钙离子内流启动并激活下游信号通路引起其损伤。瞬时受体电位通道6（TRPC6）是众多钙离子内流调节通道中的一种，并在目前的研究中体现出越来越大的作用。在疾病中Ca2+内流而TRPC6通道发挥其重要的功能。现如今有相关资料表明在急性高血压时TRPC6调控胞内钙离子增加，崩解线粒体，并有足细胞凋亡的情况出现。具体的机制可能为TRPC6激活后钙离子内流增大，胞浆内钙离子浓度增大，线粒体钙浓度过载，继而细胞核内钙离子增加，导致转录过程异常，一系列的变化最终导致细胞凋亡。为了确认该机制，我们确定将建立急性高血压

4、小鼠足细胞损伤的模型，利用基因干扰技术以及特异性蛋白/通道抑制剂，努力发现导致足细胞损伤的具体原因和作用机制，以及通过TRPC6调控钙离子内流的方式。通过检测Ca2+-dependent信号通路，阐明TRPC6在网络调控中的具体方式、作用机制；干预其在体内及体外的进展与变化，探索通过阻断TRPC6通道的靶点来减轻足细胞损伤的可能，努力探寻新的理论依据于临床治疗中。目的：本研究采用“活体冷冻技术”处理小鼠肾组织标本，目的是在原位（insitu）保持小鼠肾小球足细胞的TRPC6的稳定状态和结构特点，通过运用免疫组化、免疫荧光、RealTim

5、e-PCR之类的技术来获得处于异常血液动力学条件下（特别是在急性高血压的条件下），TRPC6蛋白在足细胞上的实时改变。以及查看急性高血压时线粒体的数量和形态结构的变化特点于透射电镜下。方法：1.实验动物：准备昆明小鼠10只，体重在25-35克范围内，均为雄性鼠，购买自北京维通利华公司。2.实验分组：（1）应用IVCT固定的正常血流组5只（2）应用IVCT固定的异常血流组5只（迅速建立急性高血压模型，具体为结扎昆明小鼠腹主动脉15分钟左右）3.观察肾小球结构在异常血流动力学（特别是急性高血压）条件下形态学上III中国医科大学硕士学位论文的

6、改变，并尽可能的利用IVCT技术探寻TRPC6在该条件下的动态变化与结构特点，熟练应用HE染色、免疫组化以及免疫电镜等技术完善对上述变化的观察。如条件足够，将在进一步的实验中应用诸如westernblot等技术进一步探寻TRPC6表达的定量观察。以及查看急性高血压时线粒体的数量和形态结构的变化特点于透射电镜下。结果：通过对昆明鼠制造急性高血压模型，我们在接下来的实验里继续探究在血流动力学条件不同时鼠肾小球的TRPC6表达的不同和和具体的分布情况的改变，并顺带观察肾小球的结构于显微镜下的改变。1.TRPC6在肾小球足细胞的分布变化：a.我

7、们观察到在血流条件正常时，TRPC6蛋白沿着昆明鼠肾小球毛细血管袢表达，大致为连续颗粒状分布；b.但是在急性高血压时（人工造模：结扎昆明小鼠腹主动脉15分钟），TRPC6开始在胞浆内出现并向核周及核内转移，而其在毛细血管袢的表达显著降低，并断续分布。2.昆明鼠肾小球于急性高血压时组织结构的改变：通过显微镜观察a.血流条件正常时,肾小囊毛细血管表面光滑，可见红细胞于其中固定，血管形态饱满，可见裂隙状的Bowman囊；b.在急性高血压时（人工造模：结扎昆明小鼠腹主动脉15分钟）依然可见红细胞于其中固定，但不如a组饱满，同时可见肿胀的Bowm

8、an囊和肾小管。结论：1.急性高血压条件下TRPC6蛋白在足細胞的表达减少。2.在急性高血压条件下TRPC6在胞浆内增加并向核周及核内转移。关键词：TRPC6；急性高血压；Ca2+IV中国医科大学硕士学位论