专业基础综合实验报告21212121

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1、题目:专业基础实验报告学院:化学化工学院专业:生物工程班级:1201学号:2012060301学生姓名:袁超指导教师：谢涛张儒完成日期：2014年12月15日～2015年1月2日专业基础综合实验任务书学院：化学化工专业：生物工程班级：120116姓名：袁超一．专业基础综合实验题目：1.培养基中磷浓度对酿酒酵母胞内磷积累的影响2.不同碳源对人参发根培养的影响3.发根农杆菌中Rol基因的分子检测二．专业基础综合实验内容及实验要求：1.实验内容：认真完成专业基础综合实验题目要求的实验，对相关结果进行处理和分析。2.实验要求:1.巩固单因

2、素试验设计方法，超净工作台、通风摇瓶柜、制冰机、超低温离心机、超声波细胞破碎仪和紫外分光光度计等常用仪器设备的使用方法；掌握分批发酵及过程取样方法；学会细胞破碎的方法；掌握胞内物质的测定方法；了解聚磷酸盐的一些基本知识。2.学会MS及1/2MS培养基中大量元素、微量元素、铁盐和维生素等母液的配制；掌握MS及1/2MS培养基的配制方法；掌握植物细胞或基因工程材料的继代、接种等实验方法；学会细胞工程技术中的基本原理和操作方法。3.学会LB培养基的配制、TBE等缓冲液的配制；巩固无菌操作实验技巧；掌握PCR技术的基本原理和操作方法；掌握

3、发根农杆菌介导基因转化的原理；掌握RolB/RolC基因的作用机制和原理三．实验时间安排：　2014年　12月　15　日至　2015年1月　2日第16周：培养基中磷浓度对酿酒酵母胞内磷积累的影响第17周：不同碳源对人参发根培养的影响第18周：发根农杆菌中Rol基因的分子检测16四．主要参考文献：[1]诸葛健,王正祥.工业微生物实验技术手册[M].北京:中国轻工业出版社,1994,6:220-222.指导教师：　谢涛张儒　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　教研室主任：　　　　谢涛　　　院教学主任：陈建芳　　　　　　

4、　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2015　　年　1　月　4　日　　　　　　实验一.培养基中磷浓度对酿酒酵母胞内磷积累的影响摘要：酿酒酵母胞内磷与胞内乙醇的积累受多种因素的影响，如渗透压、pH值、葡萄糖浓度、氮源浓度和磷源浓度等。本实验主要通过控制其他条件正常，研究不同磷浓度和葡萄糖浓度对其积累量的影响。以酿酒酵母为出发菌株，以种子的培养条件进行发酵，分别在适磷条件和富磷条件下进行研究。关键词：葡萄糖浓度；胞内磷；乙醇前言:胞内磷包括游离磷和聚合磷，无机聚磷酸盐（PolyP）最早是在酵母的异染质粒中发现的，它广泛分布于细菌、真

5、菌、植物和动物细胞中，特别是酵母菌中含量丰富，如在S.cerevisiae中可高达细胞干重的10-20%。PolyP是一种含有几个到数百个正磷酸残基由高能磷酸键组成的线性聚合物，其聚合度及其存在的浓度随生理因子的不同而发生变化，这些生理因子包括培养基中磷酸盐浓度、碳源种类、氮源饥饿、碱性氨基酸添加、液泡液酸性化和呼吸类型等。在细胞中起着重要的作用。161材料和方法1.1菌株酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)1.2培养基和培养条件1.2.1培养基种子培养基(g/L)：葡萄糖100，尿素2，玉米浆8，自然pH值

6、。合成发酵培养基(g/L)：葡萄糖，尿素，KH2PO4，MgSO4·7H2O0.5，CaCl20.1，微量元素溶液1mL/L，pH值不调。微量元素溶液(g/L)：KI0.2，ZnSO4·7H2O0.9，Na2S0.3，SnCl20.1，NiCl0.05，NaBr0.05，MnSO4·H2O2.5，CuSO4·5H2O0.15，Co(NO3)2·6H2O0.01，NaB4O7·10H2O0.6，(NH4)6Mo2O24·9H2O0.02，Al2(SO4)30.1，FeSO4·7H2O5.56，Na2·EDTA·2H2O7.46。1.

7、2.2培养条件种子培养：挑取新鲜的斜面种子1环接入种子培养液中，于30℃下一定转速下培养20h左右，即可用作种子液。发酵方法：按5%的接种量将刚培养好的种子液接入预先装有50mL发酵培养液的500mL摇瓶中，按种子培养条件发酵。1.3分析方法1.3.1提取取一定量的发酵液离心，菌体用去离子水反复洗涤、离心两次，湿菌体与0.15%（活性氯浓度）的次氯酸钠溶液按1:5（w/v）的比例混合均匀，于25℃下反应45min后离心，菌体用去离子水反复洗涤、离心两次；然后，用适量去离子水萃取两次（每次的萃取时间为2h，且每隔30min振荡混匀一

8、次），并于4000r/min离心5min，萃取液合并入50mL容量瓶中，用去离子水定容摇匀；分别取萃取液10mL、5mL用于测定胞内甘油和游离磷含量。161.3.2测定游离磷（Pi）的测定：采用钼蓝比色法［1］。PolyP的测定：取一定量上述胞内萃