维生素D_维生素D受体调控钙结合蛋白28K在骨骼发育中的作用及机制研究

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1、分类号：R726.8单位代码：10159密级：公开学号：201510248博士学位论文中文题目：维生素D/维生素D受体调控钙结合蛋白28K在骨骼发育中的作用及机制研究英文题目：VitaminD/VitaminDreceptorregulatesSkeletalDevelopmentthroughModulatingCalbindinD28K论文作者：杨丽萍指导教师：赵群教授学科专业：小儿外科完成时间：2018年3月中国医科大学博士学位论文维生素D/维生素D受体调控钙结合蛋白28K在骨骼发育中的作用及机制研

2、究VitaminD/VitaminDreceptorregulatesSkeletalDevelopmentthroughModulatingCalbindinD28K论文作者杨丽萍指导教师赵群教授申请学位医学博士培养单位第二临床学院一级学科临床医学二级学科儿科学研究方向维生素D与骨骼发育论文起止时间2015年9月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月中国医科大学博士学位论文中国医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得

3、的研究成果，论文中除加以标注的内容外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本研究提供贡献的其他个人和集体均已在文中进行了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：2018年3月23日中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部

4、分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密（），在年后解密适用本授权书。（保密：请在括号内划“√”）论文作者签名：指导教师签名：日期：2018年3月23日日期：2018年3月23日中国医科大学博士学位论文摘要目的：机体内钙和骨稳态是紧密联系在一起的。骨骼结构的完整性依赖于血液中充足的钙供应，也间接的来自于肠钙吸收和肾钙的重吸收。而在另一方面，在负钙平衡状态下，钙也可以从骨骼释放出来以维持血钙水平。在调节钙转运的过程中，钙结合蛋白28K（CaBP28K）起到重要

5、的作用，其与维生素D/维生素D受体（VDR）在骨骼发育过程中的关系尚未阐明。本研究意在探讨维生素D/VDR与CaBP28K在骨骼发育过程中的作用及机制。研究方法：本研究一共分为三个部分。第一部分：产妇和新生儿脐血血清中25(OH)D3与CaBP28K的相关性及其与新生儿骨骼发育指标之间的关系利用ELISA试剂盒测定产妇与其新生儿脐血血清中25羟基维生素D3[25(OH)D3]和CaBP28K的含量；收集新生儿的骨骼生长发育指标：体重（WT），体长（BL），头围（HC），胸围（CC），股骨长（FL），双顶径

6、（BPD）；分析产妇与新生儿脐血血清中25(OH)D3与CaBP28K的相关性；同时分析血清中25(OH)D3与CaBP28K和新生儿骨骼发育指标之间的相关性。第二部分：胚胎小鼠股骨中CaBP28K的时空表达以及成骨细胞中1,25(OH)2D3/VDR与CaBP28K的调节关系在胚胎小鼠股骨中，利用免疫组织化学及免疫荧光定位CaBP28K的表达并分析随着胎龄的变化股骨中CaBP28K的表达变化趋势。在小鼠成骨细胞系MC3T3-E1及人成骨细胞系hFOB1.19中分别通过加入1,25(OH)2D3、转染腺病

7、毒过表达VDR以及转染VDRsiRNA干扰VDR的表达后，分析CaBP28K的表达变化，同时在1α羟化酶敲除小鼠股骨中分析了CaBP28K的表达变化趋势，利用双荧光素酶报告基因实验分析了VDR与CaBP28K启动子区域的结合活性；第三部分：在MC3T3-E1中过表达CaBP28K对其增殖、分化及凋亡的影响，以及对骨发育相关基因的影响在小鼠成骨细胞系MC3T3-E1中，调节CaBP28K的表达，分析成骨细胞的增殖、分化及凋亡的变化，同时分析下游的成骨细胞分化、矿化、增殖指标的变化。I中国医科大学博士学位论文

8、筛选可能的下游基因；在产妇和新生儿脐血血清样本中检测筛选指标的含量，分析该指标与CaBP28K和骨代谢物CTX、OPN、OPG、PYD的相关性。结果：第一部分：产妇血清和新生儿脐血血清中25(OH)D3与CaBP28K含量的相关性及其与新生儿骨骼发育指标之间的关系1、在产妇血清和新生儿脐血血清中，25(OH)D3的含量呈显著正相关，N=58，R=0.836，P=0.000；2、在产妇血清和新生儿脐血血清中，CaBP28K的含量