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《SN0331-1994出口畜产品中炭疽杆菌检验方法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、食品标准网（http://www.spbz.cn/）SN0331-94中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口畜产品中炭疽杆菌检验方法Methodsfortheinspectionofbacillusanthraxinanimalby-productsforexport代替ZBX09010—861主题内容与适用范围本标准规定了出口畜产品中炭疽杆菌的检验。本标准适用于出口鬃、毛、绒、野生动物毛皮、生骨粒及其他畜产品中炭疽杆菌的检验。2设备和材料2.1离心机：带容量在500mL以上的离心管。2.2恒温培养
2、箱：36±1℃。2.3恒温水浴：30～65℃。2.4生物学显微镜。2.5三角烧瓶：容量250mL、500mL和1000mL,带胶塞。2.6平皿：直径90mm或100mm。2.7试管：10mm×120mm和20mm×140mm。2.8吸管：1ml和10ml,带0.01mL和0.1mL刻度。2.9L形玻璃棒。2.10注射器：1mL带5号针头。2.11棉拭子：长180mm的竹签或铁丝,一端裹20～30mm长的棉球,用水浸湿,另一端裹在试管的棉塞内,插入试管高压灭菌。2.12棉布袋：70mm×130mm,带缩
3、口绳。2.13养鼠罐。3培养基和试剂3.1溶菌酶多粘菌素琼脂：见A1。1食品标准网（http://www.spbz.cn/）3.2戊烷脒多粘菌素琼脂：见A2。3.3营养肉汤：见A3。3.4营养琼酯：见A4。3.5洗样液：见A5。3.6生理盐水：见A6。3.7缓冲生理盐水：见A7。3.8固定液：见A8。3.9炭疽杆菌噬菌体：见A9。3.10革兰氏染色液：见A10。3.11大豆凝集素稀释液：见A11。4抽样4.1鬃、毛、绒、生骨粒4.1.1抽样数量按生产日期或原料来源划分批次。每批按30％开包(箱)抽样或
4、在扎包(装箱)时由每包(箱)各取一份样品。4.1.2抽样方法用火焰灭菌的镊子或戴经消毒的乳胶手套从每包(箱)的不同部位共抽样3～5g,装入灭菌棉布袋内,将袋口扎紧,作上批次标记。4.1.3送样将样品装入塑料袋或铁桶内,密封后送样。4.2动物毛皮4.2.1抽样比例逐张取样。4.2.2抽样方法用灭菌棉拭子涂擦样皮的真皮面。将棉拭子插入试管,塞紧棉塞。4.2.3送样将试管逐支用纸包裹,装入铁桶内,再用棉花或软纸填充空隙,密封后送样。5样品处理2食品标准网（http://www.spbz.cn/）5.1鬃、毛
5、、绒、生骨粒5.1.1根据样品多少将适当数量的同批样品(最多不超过10份)合编为一个检验样品单位,作好记录。5.1.2从合编为一个检验样品单位的每个样品袋中各取1～2g样品,一起放入一个适当大小的灭菌三角烧瓶中。5.1.3加样品量30～40倍(W/V)的预冷洗样液于三角烧瓶,用灭菌胶塞将瓶口塞严。5.1.4将三角烧瓶放入冰水浴或0～4℃冰箱内,间或摇动约1h。5.1.5将瓶中洗样液倒入500mL灭菌离心管内,盖住管口,以3000r/min离心20min。5.1.6弃去上清液(注意防止污染),加少许灭菌
6、水,使沉淀均匀悬浮。5.1.7将离心管静置5～10min,待杂质下沉后,将上悬液移入另一支灭菌试管内,于65℃恒温水浴加热30min。5.1.8加洗样液后的样品于热处理前如不能及时检验,应贮于0～4℃冰箱内,以防芽胞发芽。5.2动物毛皮如不立即检验,将棉拭子放于0～4℃冰箱内。6检验方法6.1分离培养6.1.1鬃、毛、绒、生骨粒6.1.1.1根据每管所包括样品份数之多少,各接种1～3个溶菌酶多粘菌素平板或戊烷脒多粘菌素平板。接种时,用灭菌吸管吸取样液,滴加于平板表面,各0.1～0.3mL。如有剩余样品
7、,可增接数个平板,直至将样品接种完。6.1.1.2用灭菌L形玻璃棒将滴加的样液涂布均匀。如样液较多,可将平板置于36±1℃温箱,微开皿盖,使样液迅速干燥。6.1.1.3翻转平皿,置于36±1℃恒温箱,培养24～48h。6.1.2动物毛皮6.1.2.1将棉拭子由试管内取出,各涂抹一个溶菌酶多粘菌素平板或戊烷脒多粘菌平板。6.1.2.2翻转平皿,置于36±1℃恒温箱,培养24～48h。6.2菌落及菌形观察6.2.1将培养的平板取出,用肉眼,必要时借助放大镜观察有无典型炭疽杆菌菌落。炭疽杆菌菌落扁平、暗灰色
8、、不透明、无光泽、表面粗糙、边缘不整齐。用放大镜观察,边缘呈卷发状,3食品标准网（http://www.spbz.cn/）用接种针探触,有粘滞感,挑之,可拉起丝。6.2.2从典型或可疑菌落取培养物制备涂膜,经革兰氏染色,镜检。炭疽杆菌被染成蓝紫色,由多个菌纵连成长链。少数单个菌呈大杆状,两端平齐。有的菌体中央可见卵圆形不着色的芽胞。芽胞不使菌体膨大。6.3肉汤培养特性观察取菌落和菌形均似炭疽杆菌的培养物,接种肉汤管,于36±1℃恒温箱培养5～12h,观察
