医药学医学毕业论文 缺铁对大鼠胃排空功能的影响及其机制

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：医药学医学论文题目：缺铁对大鼠胃排空功能的影响及其机制指导老师：XXX二〇一一年十二月十日关键词：贫血缺铁性胃病理生理学胃肠疾病疾病模型动物　　摘　要　目的：研究缺铁对大鼠胃排空功能的影响及其机制.方法：将4wk龄Wistar大鼠60只随机分为两组：缺铁性贫血（IDA）组和正常对照组，各30只，分别饲以低铁和正铁饲料（含铁量分别为12.4mg/kg和385.5mg/kg），共8wk.采用酚红排空试验测定胃排空功能，计算排空率；用DCP-AES测定仪测定胃窦组织铁含量；RIA法测定胃窦组织环核苷酸cAMP和cGMP含量；组

2、化染色显示胃窦肌间神经丛AchE和NOS，并应用彩色图像分析系统测定标本阳性物面密度.结果：IDA大鼠胃排空率为(90±10)%，显著大于对照组（78±9)%(P＜0.05）；胃窦组织铁含量为(30±9)μg/g，显著低于对照组（311±69)μg/g(P＜0.01）；胃组织上清液cAMP和cGMP浓度分别为(11.7±3.8)nmol/L和(2.0±0.7)nmol/L，均显著低于对照组（15.0±2.6)nmol/L(P＜0.05)；(2.8±0.4)nmol/L(P＜0.01），但cAMP/cGMP比值（5.8±0.2）,显著高于对照组（5.4±0.1)(P＜0.01）；胃窦肌间神

3、经丛AchE面密度（11.8±1.2)%,显著低于对照组（13.9±1.6)%(P＜0.01），但其NOS面密度（10.8±1.6）%,显著高于对照组（9.5±1.0)%(P＜0.05）.结论：IDA大鼠胃排空功能亢进.缺铁可能通过影响Ach-cAMP,NO-cGMP信息传递，使cAMP/cGMP比值显著升高，导致胃平滑肌收缩功能亢进.　　0　引言　　缺铁（irondeficiency,ID）是当今世界上危及人类（尤其是儿童）健康的营养学问题之一，不仅能引起贫血，还可导致一系列非血液系统功能异常［1］.对缺铁性贫血（irondeficiencyanemia,IDA）的胃肠道症状，我们［2

4、］通过建立IDA大鼠模型，首次从小肠运动功能改变的角度进行了研究报道，并同步观察了其胃排空功能（gastricemptyingfunction,GEF）改变，检测了胃窦组织的铁含量、环核苷酸水平及肌间神经丛NOS,AchE阳性神经面密度，以期对ID所致胃肠功能异常及其机制深入探讨.　　1　材料和方法　　1.1　材料　4wk龄健康WISTAR大鼠60只（第三军医大学实验动物研究所提供），雌雄各半，随机分为IDA模型组（IDA组）和正常对照组（对照组）,各30只，按性别分离笼养，分别饲以低铁和正铁饲料（参考美国AOAC配方［3］,含铁量分别为12.4mg/kg和385.5mg/kg）.自由饮

5、用去离子水，每周测体质量（BW）、Hb.8wk末IDA组Hb平均降至80.5g/L(67.8～98.3g/L)，禁食12h后开始实验.　　1.2　方法　①Hb测定：采用高铁氰化法.②GEF测定：采用酚红排空试验法.每组各取10只大鼠，每只灌服酚红糊剂（每mL含酚红0.1mg）2.5mL，40min颈椎脱臼处死，剖腹取出胃肠，自幽门括约肌处剪下胃，将其内残留酚红充分溶于2mL去离子水，3500r/min离心15min，取上清于玻璃棉滤器过滤，滤液以日本日立200-20型分光光度计于λ/620nm处测吸光度为胃内色素残留量，求胃排空率［（灌入酚红吸光度－残留酚红吸光度）／灌入酚红吸光度×10

6、0％］，随后剪取胃窦测其铁含量.③胃窦组织铁含量测定：应用DCP-AES分析仪(美国Beckman公司产品）测定.④胃窦组织环核苷酸含量测定：参照文献［4］.每组各取10只大鼠，腹腔注射10g/L戊巴比妥钠2mL,麻醉后剖腹取胃窦，纵剖为2份（分别用作检测cAMP和cGMP），测cAMP部分称重后置入预冷的lmol/L高氯酸（l0mL/g），匀浆，2000r/min离心10min,取0.5mL上清液于试管内，200g/LKOH中和后，直接行RIA分析；测cGMP部分需先将cAMP与cGMP分开，即以阴离子交换柱（甲酸型Dowex1×8）吸附样品，再用不同浓度洗脱（交换下cAMP），减压、

7、干燥后溶于反应缓冲液，再行RIA分析.试剂盒为中国军事医学科学院产品，标记物分别为3H-cAMP和3H-ScGMP，国产FJ-2008型液体闪烁计数仪测放射性.⑤胃窦肌间神经丛AchE和NOS组织化学染色和面密度测定：每组10只大鼠，参照文献［5］取出和固定胃窦，并分离出纵肌-肌间神经丛，标本置于0.01mol/LPBS（4℃）过夜；组化染色：AchE采用亚铁氰化铜法［6］，即标本用蒸馏水漂洗后，置于37℃孵育液60min，蒸馏水漂