医药学临床医学毕业论文 黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mrna及透明质酸的影响

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：医药学临床医学论文题目：黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA及透明质酸的影响指导老师：XXX二〇一一年十二月十日【摘要】目的探讨黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA及透明质酸的影响。方法用含/未含黄芪的培养液培养糖尿病足溃疡处成纤维细胞，RT-PCR检测透明质酸合酶mRNA表达，放免法检测培养上清液中透明质酸含量。结果用含黄芪的培养液培养的糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达及培养上清液中透

2、明质酸含量高于未含黄芪的培养液培养的细胞，且差异有显著性（P0.05）。结论黄芪能上调糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达和促进透明质酸的合成。【关键词】黄芪；糖尿病足；成纤维细胞；透明质酸合酶；透明质酸ThehyaluronicsynthasemRNAexpressionsandhyaluronicacideffectsofastraglusonfibroblastsindiabeticfootulcer【Abstract】ObjectiveTostudythehyaluronics

3、ynthasemRNAexpressionsandhyaluronicacideffectsofastraglusonfibroblastsindiabeticfootulcer.MethodsThechangeofthehyaluronicsynthasemRNAexpressionsweremeasuredbysemi-quantitativeRT-PCR.thehyaluronicacidcontentwasusedtodetectbyradioimmunity.ResultsItshowe

4、dthatthehyaluronicacidsynthasemRNAexpressionsandhyaluronicacidcontentweresignificantlyhighercomparedwiththoseculturedwithoutastraglus（P0.05）.ConclusionTheseresultssuggestastraglushasacertaineffecttoup-regulatedhyaluronicsynthasemRNAexpressionsandenhan

5、cehyaluronicsynthesizedonfibroblastsindiabeticfootulcer.【Keywords】astraglus;diabeticfoot;fibroblast;hyaluronicsynthase;hyaluronicacid正常伤口的修复包括炎症、增生和修复三个阶段，在伤口愈合过程中，稳定细胞和不稳定细胞都具有完全的再生能力，但能否重新构建为正常结构尚依赖细胞外基质，透明质酸作为细胞外基质的主要成分，主要由成纤维细胞分泌［1］；本实验体外用黄芪作用糖尿病足

6、溃疡处成纤维细胞，通过检测成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达及透明质酸的分泌量，旨在探讨黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞功能的影响。1材料与方法1.1材料与主要试剂黄芪注射液（成都地奥公司），TRizolReagentTotalRNAIsolationReagent（GiBco公司），cDNA第一链合成Kit（上海生物工程公司）、dNTP、TaqDNA聚合酶、引物合成（上海生物工程公司），DEPC、DNAmarker（华美生物公司），胎牛血清（四季清公司），异丙醇等常用化学试剂（Sigma公司或国产

7、分析纯）；透明质酸放射免疫检测试剂盒（上海海研所）。透明质酸合酶引物正/负链序列：5′AAACCGCTGGAACAAGTC3和5′AACCCTGAGCCAATCAAA3′，GAPDH引物正/负链序列：5′TGCTTTCCGTCGTATCCA3′和5′CACCGTCAGTAGCCCAGT3′，扩增片段大小分别为175和221bp。1.2方法1.2.1成纤维细胞培养取溃疡创面组织，经0.01mg/L新洁尔灭浸泡10min后生理盐水漂洗，剪成1㎜3大小，贴壁2h后将组织块培养于含100ml/L胎牛血清的

8、DMEM培养基中，培养条件为37℃，体积分数为5%CO2，细胞生长至对数生长期后，将细胞悬液调整至1×107/L，移入24孔板中培养，待细胞贴壁后用含/未含20g/L黄芪的培养液进行培养，待瓶底长满细胞后，以2.5mg/L胰酶消化传代，培养6天后，收集细胞作相应检测。1.2.2半定量RT-PCR检测透明质酸合酶mRNA表达细胞RNA的提取按TRizolReagent试剂盒说明书进行；用cDNA第一链合成Kit将RNA逆转录为cDNA按试剂盒说明书进行；半定量PCR反应扩增透明质酸合