人白蛋白小分子荧光探针DDABP的属性表征与医学应用研究

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1、学校代码10459学号或申请号密级公开硕士学位论文人白蛋白小分子荧光探针DDABP的属性表征与医学应用研究作者姓名：孙英导师姓名：李倩如副教授学科门类：医学专业名称：免疫学培养院系：基础医学院完成时间：2018年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterCharacterizationandmedicalapplicationofhumanalbuminsmallmoleculefluorescentprobeDDABPByYingSunSupervisor:Pro

2、f.QianruLiDepartmentofImmunologyTheBasicMedicalCollegeofZhengzhouUniversityMay2018原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根

3、据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日人白蛋白小分子荧光探针DDABP的属性表征与医学应用研究硕士研究生：孙英导师：李倩如副教授郑州大学基础医学院免疫学系河南郑州450006摘要背

4、景和目的:人白蛋白（humanalbumin，HA）是人体内浓度最高的血浆蛋白，血浆中浓度为35-55g/L，占总血浆蛋白的50%以上。HA仅在肝脏中合成，正常人以12-25g/d的速率合成。多项研究表明体液中的HA含量的变化与多种疾病（如糖尿病、肾病、和肝损伤）的发生、发展密切相关。因此，精确检测体液中白蛋白含量在临床诊断和生物医学研究中意义重大。本论文以HA为靶标分子，通过筛选获得HA特异性荧光探针底物1,3-二氯-7-羟基-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮甲基联苯甲酸酯(DDABP)，并建立相应的荧光分析方法，以用于复杂体系中白蛋白

5、的快速检测。筛选的新型探针分子DDABP及相应的分析方法为探索白蛋白分子的体内功能、代谢规律及在相关疾病中的作用提供参考。方法:1.利用荧光分析和紫外分光光度法考察探针与白蛋白反应的光谱变化。2.通过表型筛选实验考查探针的选择性，测量定量下限值评估探针的灵敏性，小分子离子干扰实验考察探针的生物稳定性。3.基于液相质谱的蛋白质组学方法考察探针的识别机理。4.利用探针构建的荧光分析方法检测细胞上清和人血浆中白蛋白，并与其它方法比较。5.应用荧光成像技术，可视化分析肾细胞摄取白蛋白的生物学过程。I结果:1.探针DDABP被白蛋白代谢后，在662n

6、m处有显著的荧光信号产生，同时反应体系的紫外吸收光谱也发生相应的变化。2.探针DDABP具有非常好的选择性，仅能被人白蛋白水解，而其他血浆水解酶和蛋白分子不会引起荧光信号产生；并且该探针具有极高的灵敏性，检测下限为6.51mg/L；该探针抗干扰能力强，不受内源性氨基酸和金属离子影响。3.探针DDABP的检测是基于白蛋白的假酯酶活性，探针被白蛋白水解后，酯键断开，醇基部分游离出来，羧酸部分通过共价结合到白蛋白分子的赖氨酸残基上。4.探针DDABP可以测量肝细胞分泌的微量白蛋白，且所测结果与液相质谱蛋白质组学非常接近；同时新方法测得血浆中白蛋白

7、浓度也与临床BCG方法高度一致。5.探针DDABP可以被细胞摄取的白蛋白水解，引起荧光信号的变化，可以用于可视化分析肾细胞内吞白蛋白的动态过程。结论:探针DDABP具有很高的选择性、灵敏性和抗干扰能力，可以作为一个非常有前景的工具分子，用于研究HA介导的生物过程，对于探索HA相关疾病的基础研究和临床诊断意义重大。关键词：白蛋白；荧光探针；高通量；荧光成像IICharacterizationandmedicalapplicationofhumanalbuminsmallmoleculefluorescentprobeDDABPByYingSu

8、nSupervisor:Prof.QianruLiTheBasicMedicalCollegeofZhengzhouUniversityZhengzhou,Henan，45000